| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·猪囊尾蚴病的诊断和防治研究进展 | 第12-17页 |
| ·猪囊尾蚴病概述 | 第12-13页 |
| ·囊虫病的诊断 | 第13-14页 |
| ·猪囊尾蚴病的预防和治疗 | 第14-17页 |
| ·DUTPASE的结构和催化机理研究进展 | 第17-26页 |
| ·dUTPase的结构特征 | 第17-22页 |
| ·dUTPase的催化机理 | 第22-26页 |
| ·研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 猪囊尾蚴dUTPase的克隆、原核表达及纯化 | 第27-43页 |
| ·前言 | 第27-28页 |
| ·材料和试剂 | 第28-29页 |
| ·菌种和试剂 | 第28页 |
| ·仪器与设备 | 第28页 |
| ·培养基和溶液配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·囊尾蚴总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·dUTPase的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组dUTPase的诱导表达及条件优化 | 第34页 |
| ·表达产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·纯化产物的蛋白质浓度测定(BCA) | 第35页 |
| ·结果 | 第35-41页 |
| ·猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·dUTPase基因的序列分析 | 第37-39页 |
| ·猪囊尾蚴dUTPase基因原核表达 | 第39-40页 |
| ·表达产物的纯化和蛋白质含量测定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 重组猪囊尾蚴DUTPASE的酶活性分析 | 第43-50页 |
| ·前言 | 第43-44页 |
| ·材料和方法 | 第44-45页 |
| ·实验溶液 | 第44页 |
| ·PPi标准曲线的绘制 | 第44页 |
| ·dUTPase的底物特异性实验 | 第44-45页 |
| ·重组dUTPase的活力单位和比活力的测定 | 第45页 |
| ·金属离子和EDTA对重组dUTPase活力的影响 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第45-46页 |
| ·底物的特异性实验 | 第46-47页 |
| ·dUTPase的活力测定 | 第47-48页 |
| ·金属离子与EDTA与dUTPase活性的关系 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 猪囊尾蚴dUTPase的同源建模及分析 | 第50-64页 |
| ·前言 | 第50-51页 |
| ·材料和方法 | 第51-54页 |
| ·主要数据库及软件简述 | 第51-53页 |
| ·同源建模的主要步骤 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-62页 |
| ·CY dUTPase的同源序列对比 | 第54页 |
| ·CY dUTPase的二级结构分析 | 第54-55页 |
| ·CY dUTPase同源建模 | 第55-56页 |
| ·CY dUTPase三维模型的质量评估 | 第56-60页 |
| ·CY dUTPase四级结构的预测 | 第60-61页 |
| ·CY dUTPase 3D模型与Human dUTPase3D结构的叠合 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 猪囊尾蚴dUTPase基因SIRNA表达盒(SEC)的构建 | 第64-71页 |
| ·前言 | 第64-65页 |
| ·材料和方法 | 第65-68页 |
| ·试剂和寡核苷酸的合成 | 第65页 |
| ·鼠U6启动子的制备 | 第65页 |
| ·shRNA的DNA模板的制备 | 第65-66页 |
| ·SEC的制备 | 第66-67页 |
| ·RANi检测方法的建立 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·U6启动子的扩增 | 第68-69页 |
| ·SEC的制备 | 第69页 |
| ·RT-PCR检测RNAi的效果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第6章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
