| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| ·燃料乙醇的研究现状 | 第10-11页 |
| ·纤维素和纤维素酶 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的来源及分子结构 | 第12-15页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的的分子结构 | 第13-15页 |
| ·国内外研究进展 | 第15-16页 |
| ·本论文的主要研究内容和意义 | 第16-17页 |
| ·技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·酶与试剂 | 第18-19页 |
| ·方法与步骤 | 第19-31页 |
| ·绿色木霉(Trichoderma viride)的复苏培养及保藏 | 第19页 |
| ·绿色木霉的总RNA的提取及cDNA的合成 | 第19-21页 |
| ·引物设计及PCR | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第24页 |
| ·DNA的酶切 | 第24页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·阳性重组子的筛选和酶切验证 | 第25页 |
| ·外源片段在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎 | 第26页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第26页 |
| ·质粒转化酵母感受态 | 第26-27页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第27-28页 |
| ·外源基因在酵母中的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·酶活检测 | 第29-30页 |
| ·酶学特性的研究 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-42页 |
| ·绿色木霉总RNA的提取 | 第31页 |
| ·外切葡聚糖酶CBHII在大肠杆菌中的表达 | 第31-36页 |
| ·外切葡聚糖酶基因(CBHII)表达质粒pSE-CBHII的构建 | 第31-35页 |
| ·酶活力的测定 | 第35-36页 |
| ·外切葡聚糖酶CBHII和内切葡聚糖酶EGIII在酿酒酵母中的表达 | 第36-42页 |
| ·表达载体的构建 | 第36页 |
| ·含有信号肽的cbhII和egIII基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·外切葡聚糖酶基因(cbhII)和内切葡聚糖酶基因(egIII)与pYES2载体的连接 | 第37-38页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第38-39页 |
| ·刚果红染色 | 第39-40页 |
| ·最佳诱导时间及酶活测定 | 第40页 |
| ·酶学特性的研究 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-45页 |
| ·纤维素酶的诱导 | 第42页 |
| ·RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·内切葡聚糖酶 | 第43页 |
| ·外切葡聚糖酶 | 第43-44页 |
| ·酵母转化 | 第44-45页 |
| 第五章 结论与展望 | 第45-46页 |
| ·结论 | 第45页 |
| ·展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
