| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 1 绪论 | 第13-33页 |
| ·课题背景 | 第13-14页 |
| ·禽流感病毒的分子生物学研究进展 | 第14-19页 |
| ·禽流感病毒粒子的结构 | 第14-15页 |
| ·AIV基因组及其编码的蛋白质 | 第15-16页 |
| ·流感病毒的复制 | 第16页 |
| ·血凝素(Hemagglutinin,HA)与禽流感病毒致病性的关系 | 第16-19页 |
| ·水禽流感研究进展 | 第19-21页 |
| ·水禽流感的历史 | 第19页 |
| ·水禽在禽流感流行病学中的意义 | 第19-20页 |
| ·水禽流感的公共卫生意义 | 第20-21页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第21-27页 |
| ·DNA疫苗的组成与分类 | 第21-22页 |
| ·DNA疫苗的免疫机制 | 第22-23页 |
| ·DNA疫苗的特点 | 第23-24页 |
| ·影响DNA疫苗免疫效果的因素 | 第24-26页 |
| ·DNA疫苗研究需要解决的几个问题 | 第26-27页 |
| ·鸭瘟病毒载体研究进展 | 第27-32页 |
| ·鸭瘟病毒的生物学及分子生物学特征 | 第27-30页 |
| ·鸭瘟病毒转移载体的构建策略 | 第30-32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-56页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·质粒与菌种 | 第33页 |
| ·血清与抗体 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-55页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·AIV的增殖与初步纯化 | 第37页 |
| ·AIV总RNA的提取 | 第37页 |
| ·反转录合成cDNA | 第37页 |
| ·H7HA和H9HA基因的克隆与序列分析 | 第37-41页 |
| ·重组克隆载体p-3-3.1-H7-HA和p-3-3.1-H9-HA的构建 | 第41-44页 |
| ·表达AIV的H7HA、H9HA基因重组鸭瘟病毒转移载体的构建 | 第44-45页 |
| ·H7HA和H9HA基因的DNA疫苗质粒的构建 | 第45页 |
| ·重组真核表达质粒在MDCK细胞中的瞬时表达 | 第45-48页 |
| ·瞬时表达的检测 | 第48-52页 |
| ·DNA疫苗的免疫保护效果 | 第52-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-84页 |
| ·H7HA和H9HA基因的克隆与序列分析 | 第56-67页 |
| ·H7HA和H9HA基因的PCR扩增结果 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pMD18-T-H7-HA(H9-HA)的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·H7和H9亚型HA基因的序列测定与分析 | 第58-67页 |
| ·重组克隆载体p-3-3.1-H7-HA和p-3-3.1-H9-HA的构建 | 第67-69页 |
| ·重组质粒p-3-3.1-H7-HA的鉴定 | 第67-68页 |
| ·质粒p-3-3.1-H7-HA携带真核表达元件的H7HA基因的鉴定 | 第68页 |
| ·重组质粒p-3-3.1-H9-HA的鉴定 | 第68-69页 |
| ·质粒p-3-3.1-H9-HA携带真核表达元件的H9HA基因的鉴定 | 第69页 |
| ·表达AIV的H7HA和H9HA基因重组鸭瘟病毒转移载体的鉴定 | 第69-72页 |
| ·含H7HA基因的鸭瘟病毒转移质粒的酶切结果 | 第69-70页 |
| ·含H9HA基因的鸭瘟病毒转移质粒的酶切结果 | 第70-71页 |
| ·DNA疫苗质粒的酶切鉴定 | 第71-72页 |
| ·DNA疫苗在MDCK细胞中的瞬时表达检测 | 第72-77页 |
| ·转染后的PCR检测 | 第72-73页 |
| ·瞬时表达产物的荧光检测 | 第73-74页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第74-75页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第75-76页 |
| ·表达产物的Dot-ELISA分析 | 第76-77页 |
| ·DNA疫苗的免疫效果 | 第77-83页 |
| ·制备抗原的检测结果 | 第77-80页 |
| ·抗体的检测 | 第80-81页 |
| ·T细胞亚类检测 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-96页 |
| ·关于禽流感病毒HA基因 | 第84-85页 |
| ·重组鸭瘟病毒转移载体的构建 | 第85-87页 |
| ·关于杆状病毒-昆虫细胞系统表达蛋白的优缺点 | 第87-88页 |
| ·关于AIV H7HA和H9HA基因的真核表达 | 第88-90页 |
| ·培养基中的血清 | 第88页 |
| ·载体细胞的选择 | 第88-89页 |
| ·瞬时和稳定表达 | 第89-90页 |
| ·重组质粒在真核细胞中表达的检测 | 第90页 |
| ·ELISA诊断方法的研究 | 第90-91页 |
| ·DNA疫苗的研究 | 第91-94页 |
| ·本章小结 | 第94-96页 |
| ·禽流感病毒HA基因是影响AIV毒力的主要影响因素 | 第94页 |
| ·重组鸭瘟病毒转移载体的构建对防控水禽传染病的意义 | 第94页 |
| ·杆状病毒-昆虫细胞系统表达蛋白的优点 | 第94-95页 |
| ·选择载体细胞系对转染效率的影响 | 第95页 |
| ·DNA疫苗的主要特点 | 第95-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 附录 | 第109-113页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
