| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-17页 |
| 1 绪论 | 第17-27页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·植物MT研究进展 | 第17-22页 |
| ·MT的特性 | 第18-20页 |
| ·MT基因结构及其调控 | 第20页 |
| ·MT功能 | 第20-22页 |
| ·MT基因在转基因领域的应用 | 第22页 |
| ·基因克隆技术 | 第22-25页 |
| ·生物信息学 | 第23-24页 |
| ·表达序列标签 | 第24-25页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 柽柳MT基因的克隆及序列分析 | 第27-32页 |
| ·试验材料 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-28页 |
| ·柽柳MT基因的克隆 | 第27页 |
| ·柽柳MT基因的序列分析 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·柽柳MT基因的克隆及序列分析 | 第28页 |
| ·柽柳MT基因的蛋白质家族预测 | 第28-29页 |
| ·柽柳等10种植物MT基因氨基酸的多序列比对分析 | 第29-30页 |
| ·柽柳MT疏水性预测 | 第30-31页 |
| ·信号肽检测及等电点、分子量预测 | 第31页 |
| ·10种植物MT家族蛋白的分子进化树分析 | 第31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 3 星星草MT基因的克隆及序列分析 | 第32-37页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32页 |
| ·星星草MT基因的克隆 | 第32页 |
| ·星星草MT基因的序列分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-36页 |
| ·星星草MT基因的克隆及序列分析 | 第32-33页 |
| ·星星草MT基因的蛋白质家族预测 | 第33-34页 |
| ·星星草等9种植物MT基因氨基酸的多序列比对分析 | 第34页 |
| ·星星草MT疏水性预测 | 第34-35页 |
| ·信号肽检测及等电点、分子量预测 | 第35页 |
| ·星星草MT蛋白的结构位点分析 | 第35-36页 |
| ·9种植物MT家族蛋白的分子进化树分析 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 4 柽柳MT基因单价植物表达载体的构建及遗传转化 | 第37-43页 |
| ·试验材料 | 第37页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·酶和试剂 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-40页 |
| ·质粒(小量)提取试剂盒提取质粒DNA | 第37页 |
| ·PCR扩增柽柳MT基因 | 第37-38页 |
| ·植物表达载体pRCM的构建 | 第38页 |
| ·电击法将重组质粒pRCM导入根癌农杆菌EHA105 | 第38-39页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增柽柳MT基因 | 第40页 |
| ·植物表达载体pRCM的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·转柽柳MT基因烟草的高效遗传转化体系的建立 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 5 柽柳、星星草MT基因双价植物表达载体的构建及遗传转化 | 第43-52页 |
| ·试验材料 | 第43页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·酶和试剂 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-47页 |
| ·质粒(小量)提取试剂盒提取质粒DNA | 第43页 |
| ·PCR扩增柽柳MT基因 | 第43-44页 |
| ·中间载体pRCMT的构建 | 第44页 |
| ·PCR扩增星星草MT基因 | 第44-45页 |
| ·中间载体pRXM的构建 | 第45-46页 |
| ·含柽柳、星星草MT基因的双价植物表达载体pRCXM的构建 | 第46-47页 |
| ·电击法将重组质粒pRCXM导入根癌农杆菌EHA105 | 第47页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·PCR扩增柽柳MT基因 | 第47-48页 |
| ·中间载体pRCMT的构建及鉴定 | 第48页 |
| ·PCR扩增星星草MT基因 | 第48-49页 |
| ·中间载体pRXM的构建及鉴定 | 第49页 |
| ·植物双价表达载体pRCXM的构建及鉴定 | 第49-51页 |
| ·转柽柳、星星草MT基因烟草的高效遗传转化体系的建立 | 第51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 6 转MT基因烟草当代(T_0)的分子检测 | 第52-63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| ·DNA提取试剂 | 第52页 |
| ·PCR-Southern印迹杂交试剂 | 第52-53页 |
| ·RNA提取试剂 | 第53页 |
| ·Northern印迹杂交试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·试验方法 | 第54-58页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第54-55页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第55-56页 |
| ·Northern杂交检测 | 第56-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-62页 |
| ·转柽柳MT基因烟草的分子检测 | 第58-59页 |
| ·转柽柳、星星草MT基因烟草的分子检测 | 第59-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 7 转MT基因烟草当代(T_0)的功能研究 | 第63-76页 |
| ·试验材料 | 第63页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·试验方法 | 第63页 |
| ·转MT基因烟草当代(T_0)组培苗的镉、铜胁迫研究 | 第63页 |
| ·数据分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-75页 |
| ·转柽柳MT基因烟草当代(T_0)组培苗的镉胁迫分析 | 第63-65页 |
| ·转柽柳、星星草MT基因烟草当代(T_0)组培苗的镉胁迫分析 | 第65-67页 |
| ·转柽柳MT基因烟草与转柽柳、星星草MT基因烟草耐镉能力比较 | 第67-69页 |
| ·转柽柳MT基因烟草当代(T_0)组培苗的铜胁迫分析 | 第69-71页 |
| ·转柽柳、星星草MT基因烟草当代(T_0)组培苗的铜胁迫分析 | 第71-73页 |
| ·转柽柳MT基因烟草与转柽柳、星星草MT基因烟草耐铜能力比较 | 第73-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 8 转MT基因烟草子一代(T_1)的遗传分析与分子检测 | 第76-80页 |
| ·试验材料 | 第76页 |
| ·植物材料 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·试验方法 | 第76页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的遗传分析 | 第76页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的分子检测 | 第76页 |
| ·结果分析 | 第76-78页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的遗传分析 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的PCR检测 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78-80页 |
| 9 转MT基因烟草子一代(T_1)的功能研究 | 第80-85页 |
| ·试验材料 | 第80页 |
| ·试验方法 | 第80页 |
| ·子一代(T_1)转基因烟草组培苗的镉胁迫研究 | 第80页 |
| ·数据分析 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-84页 |
| ·镉胁迫下转基因烟草子一代(T_1)幼苗的根生长情况 | 第80-82页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的苗增重量比较 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草子一代(T_1)的叶片数量比较 | 第83-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 讨论 | 第85-92页 |
| (1) 通过ESTs克隆MT基因的可行性及基因表达丰度分析 | 第85页 |
| (2) MT基因的诱导性分析 | 第85-86页 |
| (3) 双价植物表达载体的构建策略 | 第86-87页 |
| (4) Cd对植物的毒害及转基因植株的Cd抗性研究 | 第87-89页 |
| (5) Cu对植物的毒害及转基因植株的Cu抗性研究 | 第89-91页 |
| (6) 问题与展望 | 第91-92页 |
| 结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录 | 第104-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
