| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| ·怪柳研究概况 | 第9-10页 |
| ·低温胁迫对植物的影响 | 第10-12页 |
| ·低温诱导蛋白的作用 | 第12-14页 |
| ·冷适应蛋白基因 | 第14页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 2 重组酵母pYES2-cap抗逆性分析 | 第16-32页 |
| ·材料和方法 | 第16-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·酶和酵母转化主要试剂 | 第16-17页 |
| ·分子杂交检测主要试剂 | 第17页 |
| ·重组酵母胁迫处理主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·pYES2质粒的双酶切及纯化 | 第18页 |
| ·目的基因的双酶切与纯化 | 第18页 |
| ·重组质粒的构建及转化 | 第18-19页 |
| ·重组质粒 Top10F｀-pYES2-cap的PCR鉴定 | 第19页 |
| ·重组质粒 Top10F｀-pYES2-cap的双酶切鉴定 | 第19页 |
| ·重组质粒的酵母转化及鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组质粒酵母诱导表达 | 第20-21页 |
| ·重组酵母 INVSc1(pYES2-cap)的胁迫处理 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-30页 |
| ·pYES2的双酶切 | 第22-23页 |
| ·cap基因的PCR扩增及酶切 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pYES2-cap的获得 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pYES2-cap酵母的遗传转化 | 第25-26页 |
| ·酵母菌落 PCR鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒酵母诱导表达 | 第26-27页 |
| ·INVSc1(pYES2-cap)酵母抗逆性提高 | 第27-30页 |
| ·本章小结 | 第30-32页 |
| 3 cap基因山新杨的遗传转化及分子检测 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·酶和试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·cap基因植物表达载体的构建 | 第33页 |
| ·菌种的活化 | 第33-34页 |
| ·三亲交配法将中间表达载体(含cap基因)转入农杆菌 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的杨树遗传转化 | 第34-35页 |
| ·转基因山新杨的PCR检测 | 第35页 |
| ·转基因山新杨 Southern斑点杂交 | 第35-36页 |
| ·转基因山新杨 RT-PCR和Northern检测 | 第36页 |
| ·转基因山新杨 Northern印迹杂交 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·目的基因的扩增及扩增产物的双酶切 | 第36-37页 |
| ·pROKII的双酶切 | 第37页 |
| ·目的基因与载体的连接及大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·中间表达载体pCAR的鉴定 | 第37-38页 |
| ·三亲交配转化质粒的PCR电泳检测 | 第38-39页 |
| ·山新杨高效遗传转化体系的建立 | 第39页 |
| ·转cap基因山新杨的PCR检测 | 第39-40页 |
| ·转cap基因山新杨的 Southern斑点杂交 | 第40-41页 |
| ·转基因山新杨总RNA的提取和纯化 | 第41页 |
| ·转cap基因山新杨的RT-PCR检测 | 第41页 |
| ·转cap基因山新杨的Northern杂交 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 4 转cap基因山新杨的抗低温耐盐性分析 | 第43-52页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第43页 |
| ·丙二醛(MDA)含量测定 | 第43-44页 |
| ·相对电导率测定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-50页 |
| ·转cap基因山新杨的抗寒性增强 | 第44-48页 |
| ·转cap基因山新杨的耐盐性提高 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-58页 |
| ·酵母表达系统的选择及目的基因的表达 | 第52-53页 |
| ·酵母表达系统 | 第52-53页 |
| ·对目的基因的要求 | 第53页 |
| ·酵母转化子菌落 PCR检测方法优化 | 第53页 |
| ·转cap基因山新杨检测及抗逆性分析 | 第53-56页 |
| ·转基因植株的检测 | 第53-54页 |
| ·转基因植株耐盐抗寒性与Northern相关性分析 | 第54-55页 |
| ·植物体抗性机制的交叉性 | 第55-56页 |
| ·cap基因功能评价 | 第56页 |
| ·问题和展望 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
