| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-28页 |
| 1 引言 | 第18页 |
| 2 蝎昆虫毒素的结构研究 | 第18-22页 |
| ·兴奋型蝎昆虫毒素与哺乳动物毒素结构比较 | 第18-19页 |
| ·兴奋型蝎昆虫毒素的结构特点 | 第19-22页 |
| 3 蝎昆虫神经毒素的活性测定方法 | 第22-24页 |
| ·毒理学方法 | 第22-23页 |
| ·电生理学方法 | 第23-24页 |
| ·竞争结合试验 | 第24页 |
| 4 蝎毒素作用电压门控钠通道的研究进展 | 第24-26页 |
| ·β兴奋型毒素在钠离子通道上的作用位点 | 第24-25页 |
| ·β兴奋型毒素在钠离子通道上的作用机制 | 第25-26页 |
| 5 论文的设计思路 | 第26-28页 |
| ·研究背景 | 第26-27页 |
| ·实验目的 | 第27页 |
| ·技术方案及流程 | 第27页 |
| ·研究的创新点 | 第27-28页 |
| 第二章 BmK IT及其突变体BmK IT(E15G)、BmK IT(125E)、BmK IT(C-terminaltruncated)的表达、纯化、鉴定 | 第28-41页 |
| 1 实验材料 | 第28-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·主要的酶和生化制剂 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-37页 |
| ·寡居核苷酸引物的设计 | 第30-31页 |
| ·BmK IT的定点突变 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pTWIN1-BmK IT-E15G,pTWIN1-BmK IT-125E,pTWIN1-BmKIT-C-terminal truncated的构建 | 第33-35页 |
| ·rBmK IT及rBmK IT(E15G)、rBmK IT(I25E)、rBmK IT(C-terminal truncated)三种突变体的表达纯化 | 第35-36页 |
| ·rBmK IT及其三种突变体的Western blot检测 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-40页 |
| ·重组质粒pTWIN1-BmK IT-E15G,pTWIN1-BmK IT-I25E,pTWIN1-BmK IT C-terminal truncated的检测 | 第37页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·突变重组质粒测序 | 第38页 |
| ·rBmK IT及其三种突变体的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·rBmK IT及其三种突变体的Western blot检测 | 第39页 |
| ·重组BmK IT及其突变体的圆二色谱分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 rBmK IT及突变体对昆虫细胞株Sf9和哺乳动物细胞株C6的细胞毒作用分析 | 第41-50页 |
| 1 实验材料 | 第41-43页 |
| ·细胞和质粒 | 第41页 |
| ·主要的生化制剂及材料 | 第41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| ·实验用细胞的培养 | 第43页 |
| ·MTT法检测rBmK IT及其突变体对昆虫细胞Sf9及大鼠细胞C6增殖的影响 | 第43-44页 |
| ·全细胞膜片钳技术对rBmK IT的电生理学性质的确定 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| ·MTT法检测rBmK IT及其突变体对昆虫细胞Sf9及大鼠神经胶质瘤细胞C6增殖的影响 | 第45-47页 |
| ·膜片钳技术对rBmK IT的电生理学性质的确定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 rBmK IT及其突变体对Sf9及C6细胞作用的分子机制研究 | 第50-60页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| ·细胞和质粒 | 第50页 |
| ·主要的酶和生化制剂及耗材 | 第50-51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51页 |
| ·主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-55页 |
| ·实验用细胞的培养 | 第52页 |
| ·rBmK IT及其突变体与TTX在Sf9细胞上的共定位实验 | 第52-53页 |
| ·rBmK IT及其突变体与TTX在C6细胞上的共定位实验 | 第53-54页 |
| ·Far-Western blot法比对昆虫Sf9细胞和C6细胞钠通道蛋白的表达量 | 第54-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-58页 |
| ·BmK IT及其突变体与TTX在Sf9细胞上的共定位实验 | 第55-56页 |
| ·BmK IT及其突变体与TTX在C6细胞上的共定位实验 | 第56-58页 |
| ·Far-Western blot法比对昆虫Sf9细胞和C6细胞钠通道α亚基蛋白的表达量 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 BmK IT三维结构建模及晶体生长条件初筛 | 第60-68页 |
| 1 实验材料 | 第60页 |
| ·实验用蛋白及相应耗材 | 第60页 |
| ·主要实验仪器 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-64页 |
| ·PDB蛋白质结构数据库及同源序列分析 | 第60页 |
| ·SWISS-MODE蛋白质同源建模服务器和DeepView(Swiss Pdb-Viewer)程序分析 | 第60-61页 |
| ·模型表面静电势分析 | 第61页 |
| ·结晶条件和方法 | 第61-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-67页 |
| ·BmK IT同源建模模板的分析及SWISS-MODEL服务器对BmK IT的建模 | 第64-65页 |
| ·BmK IT表面静电势分析 | 第65-66页 |
| ·BmK IT蛋白质结晶条件的初步摸索 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 总结与展望 | 第72-74页 |
| 附录Ⅰ | 第74-75页 |
| 附录Ⅱ | 第75-77页 |
| 一.攻读学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 二.参与的科研项目 | 第76页 |
| 三.参加的学术会议 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简况及联系方式 | 第78-80页 |
