| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 植物钙依赖的蛋白激酶(calcium-dependent protein kinases,CDPKs) | 第12-24页 |
| ·CDPKs的结构 | 第13页 |
| ·CDPKs活性的调控 | 第13-15页 |
| ·CDPKs基因表达的调控 | 第15-16页 |
| ·CDPKs的底物及亚细胞定位 | 第16-17页 |
| ·CDPKs在植物钙信号转导中的作用 | 第17-21页 |
| ·CDPKs信号途径的特异性和广泛性 | 第21-22页 |
| ·水稻CDPKs研究情况 | 第22-24页 |
| 2 水稻矮化和赤霉素(GA)信号转导途径 | 第24-27页 |
| ·水稻矮化基因 | 第24页 |
| ·水稻赤霉素合成途径及其矮化突变体 | 第24-26页 |
| ·CDPKs在赤霉素信号途径中的作用 | 第26-27页 |
| 3 研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 不同胁迫环境下水稻钙依赖的蛋白激酶(CDPKs)基因的表达分析 | 第29-51页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·水稻CDPKs基因及其顺式元件搜索 | 第29-30页 |
| ·Rice Expression Database(http://red.dna.affrc.go.jp/RED/)中CDPKs基因相应的ESTs数据分析 | 第30页 |
| ·水稻材料培养 | 第30页 |
| ·水稻幼苗的胁迫处理 | 第30-31页 |
| ·总RNA抽取 | 第31页 |
| ·RT-PCR分析 | 第31页 |
| ·Northern blot分析 | 第31-33页 |
| 2 结果分析 | 第33-43页 |
| ·水稻CDPKs基因基本信息 | 第33页 |
| ·CDPKs基因上游启动子区顺式元件分析 | 第33-39页 |
| ·水稻CDPKs基因ESTs数据搜索以及水稻CDPKs基因在不同胁迫环境下的表达数据检索分析 | 第39-41页 |
| ·水稻CDPKs基因的表达分析 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-51页 |
| ·顺式元件分析为了解CDPKs基因的功能提供初步线索 | 第43-46页 |
| ·水稻CDPKs基因的表达具有组织特异性、品种特异性,大部分CDPKs基因受环境胁迫诱导发生表达变化 | 第46-51页 |
| 第三章 OsCPK8基因的功能分析 | 第51-68页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第52页 |
| ·水稻愈伤诱导和遗传转化 | 第52页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第52-53页 |
| ·水稻植株对GA_3敏感性分析 | 第53页 |
| ·水稻幼苗对GA_3的敏感性分析 | 第53页 |
| ·水稻植株内源赤霉素含量分析 | 第53页 |
| ·目标基因RT-PCR分析 | 第53页 |
| ·水稻茎秆组织石蜡切片制作 | 第53-54页 |
| ·茎杆表皮细胞压片 | 第54页 |
| 2 结果分析 | 第54-63页 |
| ·转OsCPK8 RNAi基因植株的获得及表型分析 | 第54-55页 |
| ·转OsCPK8 RNAi基因植株共分离分析 | 第55-56页 |
| ·OsCPK8 RNAi矮化植株赤霉素含量及其赤霉素敏感性分析 | 第56-60页 |
| ·赤霉素信号途径相关基因的表达分析 | 第60-62页 |
| ·OsCPK8 RNAi矮化植株茎杆的细胞学切片分析 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-68页 |
| ·OsCPK8通过赤霉素信号途径参与水稻株高的调控 | 第63-65页 |
| ·OsCPK8 RNAi矮化植株矮化的细胞学基础 | 第65-67页 |
| ·对OsCPK8功能的分析有待进一步深入 | 第67-68页 |
| 第四章 OsCPK6的功能分析 | 第68-84页 |
| 1 材料与方法 | 第68-71页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·OsCPK6 cDNA克隆 | 第68-69页 |
| ·超表达载体p35S-OsCPK6的构建 | 第69页 |
| ·OsCPK6亚细胞定位载体的构建 | 第69-70页 |
| ·洋葱表皮转化和显微观察 | 第70页 |
| ·农杆菌转化水稻愈伤和转化植株的再生以及PCR阳性检测 | 第70页 |
| ·Southern blot分析 | 第70页 |
| ·Northern blot分析 | 第70页 |
| ·成株期水稻OsCPK6在干旱胁迫下转录表达的组织特异性分析 | 第70-71页 |
| ·转基因水稻非生物胁迫分析 | 第71页 |
| ·可溶性糖含量的测定 | 第71页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第71页 |
| 2 结果分析 | 第71-79页 |
| ·OsCPK6基因的克隆 | 第71-72页 |
| ·OsCPK6主要定位于细胞膜和细胞核 | 第72-73页 |
| ·OsCPK6受干旱胁迫诱导转录上升 | 第73-74页 |
| ·OsCPK6超表达使得转基因植株对干旱和盐胁迫的耐性增强 | 第74-78页 |
| ·转OsCPK6基因水稻植株耐胁迫生理分析 | 第78页 |
| ·转OsCPK6基因水稻中相关胁迫响应基因的表达 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-84页 |
| ·OsCPK6基因超表达增强转基因水稻对干旱和盐胁迫的抗性 | 第79-80页 |
| ·脯氨酸等小分子渗透物质含量的增加可能是OsCPK6超表达植株对逆境胁迫抗性增强的生理原因之一 | 第80-81页 |
| ·OsCPK6可能通过调控NAC1基因的表达来参与水稻对干旱和盐胁迫的响应 | 第81-82页 |
| ·OsCPK6定位于细胞膜和细胞核 | 第82页 |
| ·OsCPK6与抗逆水稻遗传改良 | 第82-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
| 附录 | 第98-113页 |
| 附录1 进行农杆菌介导的遗传转化时所用培养基及操作过程 | 第98-108页 |
| 附录2 CTAB法提取植物基因组DNA | 第108-110页 |
| 附录3 小样法提取植物基因组DNA | 第110页 |
| 附录4 Southern杂交程序 | 第110-111页 |
| 附录5 Northern杂交程序 | 第111-112页 |
| 附录6 个人简历 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
