| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1.文献综述 | 第14-41页 |
| ·血管生成素样蛋白(Angptl)的结构特征、克隆和分布 | 第14-22页 |
| ·血管生成素样蛋白的共同结构特征 | 第14-15页 |
| ·血管生成素样蛋白的克隆、结构特征及组织分布 | 第15-22页 |
| ·Angptl1的克隆、结构特征及组织分布 | 第15-16页 |
| ·Angptl2的克隆、结构特征及组织分布 | 第16页 |
| ·Angptl3的克隆、结构特征及组织分布 | 第16-17页 |
| ·Angptl4的克隆、结构特征及组织分布 | 第17-20页 |
| ·Angptl5的克隆、结构特征及组织分布 | 第20页 |
| ·Angptl6的克隆、结构特征及组织分布 | 第20-22页 |
| ·Angptl7的克隆、结构特征及组织分布 | 第22页 |
| ·血管生成素样蛋白的功能及可能机制 | 第22-32页 |
| ·调节血管生成 | 第22-24页 |
| ·调节脂类代谢 | 第24-32页 |
| ·抑制LPL,导致高甘油三酯血症 | 第24-28页 |
| ·促进脂肪水解 | 第28-29页 |
| ·Angptls与代谢性疾病 | 第29-32页 |
| ·调节葡萄糖代谢 | 第32页 |
| ·激活离体造血干细胞的增殖 | 第32页 |
| ·血管生成素样蛋白的调控 | 第32-39页 |
| ·核受体因子对Angptls的调控 | 第33-35页 |
| ·激素对Angptls的调控 | 第35-37页 |
| ·营养条件对Angptls的调控 | 第37页 |
| ·缺氧对Angptls的调控 | 第37-39页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第39-41页 |
| 2 实验材料与方法 | 第41-57页 |
| ·实验材料 | 第41-44页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·RNA样品 | 第41页 |
| ·DNA样品 | 第41页 |
| ·cDNA | 第41页 |
| ·用于基因片段分离的模板基因组DNA | 第41页 |
| ·用于基因染色体定位的DNA | 第41页 |
| ·工具酶、试剂盒和生化试剂 | 第41-42页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第42-43页 |
| ·培养基的配制 | 第42页 |
| ·琼脂糖电泳相关溶液配制 | 第42-43页 |
| ·质粒抽提相关溶液配制 | 第43页 |
| ·PBS | 第43页 |
| ·HepG2培养基的配制 | 第43页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·细胞 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43-44页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-57页 |
| ·总RNA的提取、纯化处理及鉴定 | 第44-46页 |
| ·组织总RNA的提取(参照Trizol(上海生工)说明书) | 第44页 |
| ·细胞总RNA的提取(参照Invitrogon Trizol说明书) | 第44-45页 |
| ·组织总RNA的纯化处理(参照DNaseⅠ说明书) | 第45-46页 |
| ·总RNA纯度鉴定及含量测定 | 第46页 |
| ·猪Angptl家族基因的克隆 | 第46-51页 |
| ·克隆猪Angptl家族基因cDNA片断 | 第46-49页 |
| ·用Rapid Amplification of cDNA Ends方法获取基因的全长cDNA | 第49-51页 |
| ·PCR扩增产物的纯化、克隆和测序 | 第51页 |
| ·DNA序列同源性检索鉴定 | 第51页 |
| ·猪Angptl家族基因的染色体定位 | 第51-53页 |
| ·基因内含子序列的扩增 | 第51页 |
| ·染色体定位所用引物的设计 | 第51-52页 |
| ·各基因染色体定位所扩增片断大小及PCR反应条件 | 第52-53页 |
| ·PCR扩增条带分型方法 | 第53页 |
| ·数据分析方法 | 第53页 |
| ·半定量PCR检测猪Angptls基因的组织表达谱 | 第53-54页 |
| ·组织表达谱的引物设计 | 第53-54页 |
| ·Angptls基因和GAPDH扩增的指数期循环数的确定 | 第54页 |
| ·Angptls基因和GAPDH扩增的PCR反应条件 | 第54页 |
| ·半定量分析 | 第54页 |
| ·葡萄糖、胰岛素、克伦特罗、地塞米松调控Angptls基因表达 | 第54-57页 |
| ·葡萄糖、胰岛素、克伦特罗、地塞米松刺激HepG2细胞 | 第54-55页 |
| ·检测基因表达的引物设计 | 第55-56页 |
| ·半定量PCR检测基因的表达 | 第56页 |
| ·葡萄糖含量的测定(己糖激酶紫外终点比色法,参照说明书) | 第56页 |
| ·细胞总蛋白质的提取与测定 | 第56-57页 |
| 3.结果与分析 | 第57-86页 |
| ·猪Angptls基因全编码区cDNA的克隆与序列分析 | 第57-66页 |
| ·猪Angptl1、Angptl2基因全编码区cDNA的克隆与序列分析 | 第57-60页 |
| ·猪Angptl3、Angptl4基因全长cDNA的克隆与序列分析 | 第60-64页 |
| ·猪Angptl6基因部分编码区cDNA的克隆与序列分析 | 第64-66页 |
| ·Angptls基因的染色体定位 | 第66-71页 |
| ·Angptls基因片断的扩增和序列分析 | 第66-67页 |
| ·Angptls基因的染色体定位 | 第67-71页 |
| ·Angptls基因的组织表达谱 | 第71-74页 |
| ·Angptl1和Angptl2基因的组织表达谱 | 第71页 |
| ·Angptl3和Angptl4基因的组织表达谱 | 第71-73页 |
| ·Angptl6基因的组织表达谱 | 第73-74页 |
| ·Angptls基因在通城猪和长白猪中的组织表达 | 第74-77页 |
| ·Angptl1和Angptl2基因在通城猪和长白猪中的组织表达 | 第74-76页 |
| ·Angptl3和Angptl4基因在通城猪和长白猪中的组织表达 | 第76-77页 |
| ·Angptl6基因在通城猪和长白猪肝脏组织中的表达 | 第77页 |
| ·Angptls基因的表达调控研究 | 第77-86页 |
| ·葡萄糖对HepG2细胞基因表达的影响 | 第78-80页 |
| ·葡萄糖对HepG2细胞基因表达的影响 | 第78-79页 |
| ·葡萄糖处理对HepG2细胞吸收葡萄糖的影响 | 第79-80页 |
| ·胰岛素对HepG2细胞基因表达的影响 | 第80-81页 |
| ·胰岛素和葡萄糖对HepG2细胞基因表达的影响 | 第81-83页 |
| ·克伦特罗对HepG2细胞基因表达的影响 | 第83-84页 |
| ·地塞米松对HepG2细胞基因表达的影响 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-93页 |
| ·猪Angptl家族因子的结构特征、氨基酸序列及亲缘关系比较 | 第86-87页 |
| ·猪Angptls在染色体上定位结果及其定位区域QTL分布 | 第87-89页 |
| ·猪Angptls的组织表达及其在脂肪型猪和瘦肉型猪中的表达差异 | 第89-90页 |
| ·葡萄糖、胰岛素、克伦特罗和地塞米松对Angptls基因表达的调控 | 第90-93页 |
| 5 结论与创新点 | 第93-95页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| ·创新点 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录 | 第107-111页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
