| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第12-14页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·发病机理 | 第12-13页 |
| ·预防与治疗 | 第13-14页 |
| 2 干扰素的概述 | 第14-18页 |
| ·干扰素的主要生物学功能 | 第14-16页 |
| ·抗病毒作用 | 第15页 |
| ·抑制肿瘤细胞增殖 | 第15页 |
| ·免疫调节功能 | 第15-16页 |
| ·其它生物学功能 | 第16页 |
| ·干扰素的抗病毒作用机理 | 第16-18页 |
| ·依赖dsRNA的蛋白激酶途径 | 第16-17页 |
| ·2-5A合成酶途径 | 第17页 |
| ·Mx蛋白质途径 | 第17-18页 |
| ·干扰素在动物病毒性疾病中的临床应用 | 第18页 |
| 3 中药抗病毒概述 | 第18-21页 |
| ·中药抗病毒的机理研究 | 第19-20页 |
| ·直接抗病毒作用 | 第19-20页 |
| ·间接抗病毒作用 | 第20页 |
| ·中药药物饲料添加剂的开发利用 | 第20-21页 |
| 4 药物的联合应用 | 第21-22页 |
| 5 小结 | 第22-23页 |
| 第二章 猪IFN-γ的克隆表达及活性测定 | 第23-46页 |
| 1 研究目的与意义 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-28页 |
| ·试验材料 | 第23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·病毒和细胞 | 第23-24页 |
| ·相关酶和试剂盒 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂及配制 | 第25-28页 |
| ·主要应用的软件 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·猪脾脏组织总RNA的提取与检测 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收纯化、克隆和测序 | 第29-30页 |
| ·PoIFN-γ/pET-28a(+)重组表达质粒的构建、转化 | 第30-31页 |
| ·PoIFN-γ/pET-28a(+)重组表达质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·重组猪IFN-γ的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western-Blot鉴定 | 第32-33页 |
| ·表达产物包涵体的提取以及目的蛋白的纯化和复性 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白浓度的测定 | 第34页 |
| ·重组PoIFN-γ的抗病毒效价测定 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·PoIFN-γ基因的克隆及序列分析 | 第35-37页 |
| ·总RNA的提取及质量检测结果 | 第35页 |
| ·PoIFN-γ的RT-PCR扩增 | 第35页 |
| ·PoIFN-γ基因的克隆鉴定 | 第35-37页 |
| ·PoIFN-γ/PET-28a(+)重组质粒的构建和转化鉴定 | 第37-39页 |
| ·PoIFN-γ/pET-28a(+)重组质粒的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·PoIFN-γ/pET-28a(+)重组质粒的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·表达产物的Western-Blot检测 | 第39-41页 |
| ·目的蛋白纯度、浓度的测定结果 | 第41页 |
| ·PoIFN-γ的抗病毒效价测定结果 | 第41-42页 |
| ·VSV的半数细胞感染量(TCID_(50))的测定结果 | 第41页 |
| ·PoIFN-γ的抗病毒效价测定结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论与小结 | 第42-46页 |
| ·猪IFN-γ的基因克隆 | 第42-43页 |
| ·表达系统的选择 | 第43页 |
| ·重组表达质粒的构建及表达 | 第43-44页 |
| ·表达产物的复性及纯化 | 第44-45页 |
| ·重组PoIFN-γ的效价测定 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 中药体外抗PRRSV的筛选及联合重组PoIFN-γ抗PRRSV的研究 | 第46-61页 |
| 1 研究目的与意义 | 第46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·药物 | 第46页 |
| ·病毒与细胞 | 第46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46-47页 |
| ·主要试剂及配制 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·药物制备 | 第47页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·病毒的增殖及TCID_(50)的测定 | 第47-48页 |
| ·药物对Marc-145细胞的毒性试验 | 第48页 |
| ·单一药物抑制PRRSV增殖试验 | 第48-49页 |
| ·重组PoIFN-γ联合中药抑制PRRSV增殖试验 | 第49页 |
| ·数据统计 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·病毒的TCID_(50)测定结果 | 第49页 |
| ·药物对Marc-145细胞毒性的评价 | 第49-53页 |
| ·药物抑制PRRSV增殖试验结果 | 第53-54页 |
| ·重组PoIFN-γ联合中药抑制PRRSV增殖试验结果 | 第54-57页 |
| 4 讨论与小结 | 第57-61页 |
| ·试验方法的选择 | 第57页 |
| ·药物对Marc-145细胞毒性 | 第57-58页 |
| ·药物抗PRRSV的效果 | 第58-59页 |
| ·重组PoIFN-γ联合中药抗PRRSV的效果 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第四章 本研究的结论和创新点 | 第61-62页 |
| 1 结论 | 第61页 |
| 2 创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
