| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-26页 |
| ·三叶斑潜蝇概述 | 第8-11页 |
| ·名称 | 第8页 |
| ·分类地位 | 第8页 |
| ·国内外分布 | 第8-9页 |
| ·三叶斑潜蝇的生物学特性 | 第9页 |
| ·三叶斑潜蝇的寄主范围和危害性 | 第9-10页 |
| ·三叶斑潜蝇的形态识别要点 | 第10-11页 |
| ·昆虫分子系统学研究概况 | 第11页 |
| ·用于昆虫分子系统学研究的分子标记 | 第11-13页 |
| ·mtDNA | 第11-12页 |
| ·转录间隔区(ITS) | 第12页 |
| ·微卫星 | 第12-13页 |
| ·生物化学技术 | 第13-16页 |
| ·DNA测序 | 第13-14页 |
| ·RAPD | 第14-15页 |
| ·RFLP分析 | 第15-16页 |
| ·同工酶电泳 | 第16页 |
| ·SSCP和DSCP | 第16页 |
| ·利用DNA序列构建系统树的方法 | 第16-19页 |
| ·系统发育关系分析方法 | 第16-18页 |
| ·构建系统树的常用方法 | 第18-19页 |
| ·距离法(distance methods) | 第18页 |
| ·简约法(parsimony methods) | 第18页 |
| ·最大似然法(maxium likelihood methods) | 第18-19页 |
| ·实时荧光PCR检测技术 | 第19-24页 |
| ·TaqMan探针 | 第19-22页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第22页 |
| ·荧光PCR的特点 | 第22-24页 |
| ·立论依据和研究意义 | 第24-26页 |
| ·立论依据 | 第24-25页 |
| ·研究意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·样品来源 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·分子生物学试剂 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·DNA的制备 | 第28-30页 |
| ·提取基因组DNA | 第28-29页 |
| ·COI基因PCR扩增 | 第29页 |
| ·电泳分析 | 第29页 |
| ·COI基因测序 | 第29-30页 |
| ·实时荧光PCR检测三叶斑潜蝇的研究 | 第30-32页 |
| ·TaqMan探针与引物的设计和合成 | 第30-31页 |
| ·实时荧光PCR检测 | 第31页 |
| ·Bio-Rad公司iCycler IQ Real Time PCR软件的设置 | 第31-32页 |
| ·数据分析和结果输出 | 第32页 |
| ·用分子数据进行系统发育关系分析 | 第32-35页 |
| ·获取相关基因序列数据 | 第32-33页 |
| ·创建输入文件 | 第33页 |
| ·序列的排序 | 第33-35页 |
| ·分子数据独立与合并分析 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·实时荧光PCR检测结果 | 第35-40页 |
| ·优化引物浓度 | 第35-36页 |
| ·优化镁离子浓度 | 第36页 |
| ·Taq酶浓度优化 | 第36-37页 |
| ·dNTP浓度优化 | 第37-38页 |
| ·探针浓度优化 | 第38页 |
| ·TaqMan探针专化性检测 | 第38-39页 |
| ·电泳检测结果 | 第39-40页 |
| ·mtDNA-COI序列结果分析 | 第40-44页 |
| ·序列分析 | 第40页 |
| ·COI序列的系统发育分系分析 | 第40-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| ·在PCR扩增中遇到的一些问题 | 第44页 |
| ·影响探针灵敏度的可能因素 | 第44页 |
| ·引物二聚体和探针特异性问题 | 第44-45页 |
| ·关于三叶斑潜蝇mtDNA-COI区序列分析 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-69页 |
| 附录A:溶液的配制 | 第54-55页 |
| 附录B:测序比对结果 | 第55-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |