| 中文摘要 | 第1-19页 |
| 英文摘要 | 第19-22页 |
| 缩略语说明 | 第22-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-66页 |
| 第一节 蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展 | 第24-27页 |
| 一 酪氨酸激酶与肿瘤 | 第24-25页 |
| 二 酪氨酸激酶抑制剂的开发及其应用 | 第25-27页 |
| 第二节 蛋白酪氨酸激酶的种类与分子机制 | 第27-32页 |
| 一 蛋白酪氨酸激酶的种类 | 第27-30页 |
| 1.受体型酪氨酸激酶 | 第27-29页 |
| ·表皮生长因子受体(EGFR)家族 | 第27-28页 |
| ·胰岛素受体家族 | 第28页 |
| ·血小板衍生生长因子受体家族 | 第28页 |
| ·成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族 | 第28页 |
| ·血管内皮细胞生长因子受体家族 | 第28页 |
| ·肝细胞生长因子受体 | 第28页 |
| ·神经生长因子受体家族 | 第28-29页 |
| ·Eph样RTK | 第29页 |
| ·Axl | 第29页 |
| 2.非受体型酪氨酸激酶(NRTK)的功能与分类 | 第29-30页 |
| ·Src家族 | 第29页 |
| ·Abl家族 | 第29-30页 |
| ·JAK(Jamus Kinase)家族 | 第30页 |
| ·FAK(Focal adhesion kinase)家族 | 第30页 |
| 二 与受体型蛋白酪氨酸激酶相关的信号转导途径 | 第30-32页 |
| 1.受体型酪氨酸激酶(EGFR)的分子机制 | 第30-32页 |
| 第三节 细胞凋亡与肿瘤 | 第32-45页 |
| 一 细胞凋亡 | 第32-34页 |
| 1.细胞凋亡的特征 | 第33页 |
| 2.细胞凋亡的形态学和生化学改变 | 第33-34页 |
| 二 与细胞凋亡相关信号转导途径 | 第34-45页 |
| 1.Caspase蛋白酶与细胞凋亡 | 第34-36页 |
| ·Caspase酶原的结构与活性 | 第35页 |
| ·Caspase的底物 | 第35-36页 |
| 2.线粒体途径与细胞凋亡 | 第36-39页 |
| ·细胞色素C与细胞凋亡 | 第37页 |
| ·Bcl-2家族成员在凋亡中的作用 | 第37-38页 |
| ·SIRT1去乙酰化酶在凋亡中的作用 | 第38-39页 |
| 3.PI3K-Akt/PKB信号转导途径 | 第39-40页 |
| 4.Ras-MAPK家族与凋亡 | 第40-42页 |
| 5.其他细胞凋亡相关因素 | 第42-45页 |
| ·Fas/FasL与细胞凋亡 | 第42-43页 |
| ·p53与细胞凋亡 | 第43-45页 |
| 第四节 细胞自噬与肿瘤 | 第45-54页 |
| 一 细胞自噬 | 第45页 |
| 二 细胞自噬的特征 | 第45-47页 |
| 1.自噬的形成特点及分类 | 第45-47页 |
| ·自噬的形成 | 第45-47页 |
| ·自噬的分类 | 第47页 |
| 三 细胞自噬的机制 | 第47-50页 |
| 1.自噬的启动 | 第47页 |
| 2.自噬的分子调控 | 第47-50页 |
| ·自噬体形成的分子机制 | 第47-48页 |
| ·两个泛素样蛋白系统 | 第47-48页 |
| ·Class Ⅲ PI3-K | 第48页 |
| ·其它 | 第48页 |
| ·自噬的信号调控 | 第48-50页 |
| ·mTOR途径 | 第48-49页 |
| ·Class Ⅰ PI3K | 第49页 |
| ·Gai3、TOR信号及氨基酸 | 第49页 |
| ·其它 | 第49-50页 |
| 四 细胞自噬与肿瘤的关系 | 第50-52页 |
| 1.自噬的生理、病理功能 | 第50-51页 |
| ·自噬的生理功能 | 第50页 |
| ·自噬在细胞代谢中的作用 | 第50页 |
| ·自噬在老化、寿命延长中的作用 | 第50页 |
| ·自噬的病理功能 | 第50-51页 |
| ·自噬与病原微生物侵染 | 第50页 |
| ·自噬与神经退行性疾病 | 第50-51页 |
| ·自噬与Danon肌病 | 第51页 |
| 2.自噬与肿瘤 | 第51-52页 |
| 五.细胞自噬与细胞凋亡 | 第52-54页 |
| 1.自噬与凋亡相互促进 | 第53页 |
| 2.自噬与凋亡相互拮抗 | 第53-54页 |
| 第五节 冬凌草甲素的研究进展 | 第54-66页 |
| 一 冬凌草甲素的构效特点 | 第55页 |
| 二 冬凌草甲素的生理和药理作用 | 第55-66页 |
| 1.抗细胞增殖作用 | 第55页 |
| 2.抗菌作用 | 第55-56页 |
| 3.抗突变作用 | 第56页 |
| 4.抗氧化作用 | 第56页 |
| 5.其他作用 | 第56-66页 |
| 第二章 冬凌草甲素诱导人表皮癌A431细胞凋亡机制研究 | 第66-92页 |
| 一 实验部分 | 第66-75页 |
| 1.实验材料 | 第66-68页 |
| 2.实验方法 | 第68-75页 |
| ·冬凌草甲素对A431细胞生长抑制的影响 | 第68页 |
| ·细胞形态学观察 | 第68页 |
| ·细胞核用Hoechst 33258荧光染色 | 第68页 |
| ·DNA提取和DNA片断化的分析 | 第68页 |
| ·流式细胞分析法测定线粒体膜电位变化 | 第68-69页 |
| ·流式细胞分析法测定凋亡比率 | 第69页 |
| ·决定细胞死亡的方式(乳酸脱氢酶活力测定) | 第69页 |
| ·Western blot analysis(免疫印迹法) | 第69-74页 |
| ·胞浆提取物的制备 | 第74-75页 |
| 二 实验结果 | 第75-86页 |
| 1.冬凌草甲素诱导A431细胞死亡呈明显剂量与时间依赖关系 | 第75-76页 |
| 2.冬凌草甲素诱导A431细胞凋亡的形态学变化 | 第76-77页 |
| 3.乳酸脱氢酶活力测定证明冬凌草甲素诱导A431细胞死亡通过凋亡和坏死途径 | 第77-79页 |
| 4.DNA电泳观察 | 第79-80页 |
| 5.Caspase-3的活化及其底物ICAD、PARP的切断 | 第80-81页 |
| 6.冬凌草甲素诱导A431细胞凋亡激活了线粒体途径 | 第81-83页 |
| 7.冬凌草甲素对A431细胞中SIRT1、p53的影响 | 第83-84页 |
| 8.PI3-K/Akt信号途径对冬凌草甲素诱导A431凋亡的影响 | 第84-86页 |
| 三 讨论 | 第86-88页 |
| 四 小结 | 第88-92页 |
| 第三章 冬凌草甲素与酪氨酸激酶抑制剂genistein活性对比 | 第92-124页 |
| 第一节 genistein的研究进展 | 第92-95页 |
| 一 Genistein的结构与功能 | 第92-93页 |
| 1.Genistein的结构 | 第92-93页 |
| 2.Genistein的生物学功能 | 第93页 |
| ·具有弱雌激素和抗雌激素的生物活性 | 第93页 |
| ·Genistein具有很强的抗氧化和抗增殖活性 | 第93页 |
| 二 Genistein的抗癌机制 | 第93-95页 |
| 1.蛋白酪氨酸激酶抑制作用 | 第93页 |
| 2.辅助放疗的作用 | 第93页 |
| 3.抑制肿瘤的侵袭 | 第93-94页 |
| 4.诱导肿瘤细胞凋亡 | 第94-95页 |
| 第二节 冬凌草甲素与genistein活性对比 | 第95-124页 |
| 一 实验部分 | 第95-102页 |
| 1.实验材料 | 第95-97页 |
| 2.实验方法 | 第97-102页 |
| ·体外MTT法检测A431细胞的生长抑制作用 | 第97页 |
| ·细胞形态学观察 | 第97页 |
| ·细胞核用Hoechst 33258荧光染色 | 第97页 |
| ·DNA提取和DNA片断化的分析 | 第97页 |
| ·PTK活力测定法 | 第97-98页 |
| ·流式细胞分析法测定凋亡比率 | 第98页 |
| ·免疫染色法 | 第98-99页 |
| ·RT-PCR法 | 第99-101页 |
| ·Western blot analysis法 | 第101-102页 |
| 二 实验结果 | 第102-118页 |
| 1.冬凌草甲素与genistein对A431细胞的细胞毒作用对比 | 第102页 |
| 2.冬凌草甲素与genistein诱导A431细胞凋亡的形态学变化 | 第102-103页 |
| 3.流式细胞术检测冬凌草甲素与genistein诱导A431细胞死亡方式 | 第103-105页 |
| 4.EGF作用于A431细胞的最佳作用时间 | 第105-106页 |
| 5.冬凌草甲素和genistein对A431细胞总酪氨酸激酶活力的影响 | 第106-108页 |
| 6.冬凌草甲素和genistein对A431细胞EGFR蛋白表达的影响 | 第108-110页 |
| 7.冬凌草甲素和genistein对A431细胞EGFR蛋白膜定位的影响 | 第110-112页 |
| 8.冬凌草甲素和genistein对A431细胞EGFR mRNA转录水平的影响 | 第112-116页 |
| 9.冬凌草甲素和genistein对A431细胞EGFR下游的PLC-γ蛋白表达的影响 | 第116-118页 |
| 三 讨论 | 第118-120页 |
| 四 小结 | 第120-124页 |
| 第四章 冬凌草甲素诱导的A431细胞凋亡部分地通过抑制Ras/Raf/ERK信号通路 | 第124-146页 |
| 一 实验部分 | 第124-129页 |
| 1.实验材料 | 第124-126页 |
| 2.实验方法 | 第126-129页 |
| ·流式细胞分析法测定凋亡比率 | 第126页 |
| ·细胞形态学观察 | 第126页 |
| ·荧光形态学检测 | 第126页 |
| ·DNA提取和DNA片断化的分析 | 第126页 |
| ·PTK活力测定法 | 第126-127页 |
| ·乳酸脱氢酶活力测定 | 第127-128页 |
| ·Western blot analysis法 | 第128-129页 |
| 二 实验结果 | 第129-141页 |
| 1.冬凌草甲素诱导A431细胞亚二倍体峰的出现 | 第129页 |
| 2.冬凌草甲素对A431细胞酪氨酸激酶活力的影响 | 第129-132页 |
| 3.冬凌草甲素对Ras、Grb2蛋白表达的影响 | 第132-133页 |
| 4.冬凌草甲素对Raf、Hsp90及ERK蛋白表达的影响 | 第133-135页 |
| 5.抑制Ras、Raf及ERK的活力增强冬凌草甲素诱导的凋亡 | 第135-141页 |
| 三 讨论 | 第141-143页 |
| 四 小结 | 第143-146页 |
| 第五章 冬凌草甲素诱导A431细胞自噬机制研究 | 第146-170页 |
| 一 实验部分 | 第146-150页 |
| 1.实验材料 | 第146-148页 |
| 2.实验方法 | 第148-150页 |
| ·荧光形态学检测 | 第148页 |
| ·DNA提取和DNA片断化的分析 | 第148页 |
| ·乳酸脱氢酶活力测定 | 第148-149页 |
| ·流式细胞分析法测定线粒体膜电位变化 | 第149页 |
| ·流式细胞分析法测定自噬的比率 | 第149页 |
| ·Western blot analysis法 | 第149-150页 |
| 二 实验结果 | 第150-166页 |
| ·-MA增强冬凌草甲素诱导的凋亡 | 第150-152页 |
| ·-MA抑制冬凌草甲素诱导的自噬 | 第152-154页 |
| 3.冬凌草甲素诱导的自噬水平的上调依赖于Ras的失活,而不依赖于Raf及ERK的失活 | 第154-156页 |
| 4.Manumycin A与冬凌草甲素对Ras蛋白表达的影响 | 第156-157页 |
| 5.Ras对冬凌草甲素诱导的Akt活力抑制的影响 | 第157-158页 |
| 6.抑制PI3-K的活力促进冬凌草甲素诱导的凋亡抑制自噬 | 第158-159页 |
| 7.冬凌草甲素诱导的A431细胞线粒体膜通透性孔的改变 | 第159-162页 |
| 8.Ras的失活提高冬凌草甲素诱导的Bax/Bcl-2的比率 | 第162-163页 |
| 9.Beclin-1没有参与冬凌草甲素诱导的A431细胞自噬的过程 | 第163-166页 |
| 三 讨论 | 第166-169页 |
| 四 小结 | 第169-170页 |
| 总结 | 第170-174页 |
| 致谢 | 第174-175页 |
| 附录 | 第175-183页 |
