| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 甘蓝型油菜中一个与黄化相关的未知基因的克隆及原核表达 | 第9-32页 |
| 1. 引言 | 第9-10页 |
| 2 材料与方法 | 第10-18页 |
| ·材料 | 第10-12页 |
| ·植物材料 | 第10-11页 |
| ·菌株和载体 | 第11页 |
| ·试剂和工具酶 | 第11-12页 |
| ·实验方法和步骤 | 第12-18页 |
| ·mRNA的分离和纯化 | 第12-14页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第14页 |
| ·cDNA合成 | 第14-15页 |
| ·BnCr4基因cDNA的获得 | 第15页 |
| ·PCR产物的纯化、连接、转化、重组子的检测及测序 | 第15-16页 |
| ·序列分析 | 第16页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第16页 |
| ·pET-32a(+)-BnCr4表达载体的构建 | 第16-17页 |
| ·BnCr4在原核细胞中的表达 | 第17页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第17-18页 |
| 3 结果与分析 | 第18-28页 |
| ·总RNA质量分析 | 第18-19页 |
| ·BnCr4基因全长cDNA的克隆及测序 | 第19-20页 |
| ·BnCr4三个不同拷贝cDNA编码区序列与拟南芥中同源序列的比较 | 第20-22页 |
| ·BnCr4基因三个不同拷贝编码的蛋白质序列与结构分析 | 第22-26页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第22-26页 |
| ·蛋白质二级结构分析及功能预测 | 第26页 |
| ·原核表达载体的构建及原核表达 | 第26-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 5 小结 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-32页 |
| 第二章 反义RNA质粒pFGC5941-BnCr40I的构建及遗传转化 | 第32-44页 |
| 1. 引言 | 第32页 |
| 2. 材料与方法 | 第32-36页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·根癌农杆菌及质粒 | 第32-33页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| ·农杆菌EHA105感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·反义片段的克隆 | 第34-35页 |
| ·BnCr4基因反义表达植物载体的构建与鉴定 | 第35页 |
| ·质粒的小量制备 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌转化 | 第35-36页 |
| ·油菜外植体的获得 | 第36页 |
| ·根癌农杆菌菌株培养及转化前处理 | 第36页 |
| ·农杆菌介导转化甘蓝型油菜 | 第36页 |
| ·不同预培养时间对油菜遗传转化的影响 | 第36页 |
| ·不同共培养时间对油菜遗传转化的影响 | 第36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·反义片段的获得 | 第36-37页 |
| ·植物反义表达载体pFGC5941-BnCr401的构建 | 第37-38页 |
| ·根癌农杆菌转化 | 第38-39页 |
| ·不同预培养时间对油菜遗传转化的影响比较 | 第39页 |
| ·不同共培养时间对油菜遗传转化的影响比较 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 文献综述 未知功能基因的研究方法 | 第44-66页 |
| 1 未知基因的获得 | 第44-45页 |
| 2 未知基因的生物信息学分析 | 第45-48页 |
| ·未知基因的确定 | 第45-46页 |
| ·基因区域及功能预测 | 第46-47页 |
| ·蛋白质结构与功能预测及方法 | 第47-48页 |
| 3 未知基因的功能研究 | 第48-61页 |
| ·转基因动物与基因功能研究 | 第48-50页 |
| ·基因转移的原理 | 第49页 |
| ·基因转移方法 | 第49-50页 |
| ·转基因动物的应用 | 第50页 |
| ·基因敲除与基因功能研究 | 第50-53页 |
| ·基本原理和操作步骤 | 第50-53页 |
| ·基因打靶技术的应用 | 第53页 |
| ·基因嵌入技术与基因功能研究 | 第53-54页 |
| ·基因诱捕技术 | 第54-58页 |
| ·基因捕获的基本原理 | 第54页 |
| ·基因捕获载体的类型 | 第54-55页 |
| ·新型基因捕获载体 | 第55-57页 |
| ·基因捕获的诱变性及表达筛选 | 第57-58页 |
| ·RNA干扰与基因功能研究 | 第58-61页 |
| ·RNAi的发现及其特点 | 第58-59页 |
| ·RNAi干扰的三种机制 | 第59-61页 |
| ·转录后沉默机制 | 第59页 |
| ·基因组DNA甲基化机制 | 第59-60页 |
| ·转译水平的基因沉默机制 | 第60-61页 |
| ·RNAi在动植物功能基因研究中的应用 | 第61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 在读硕士期间发表论文情况 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
