中文摘要 | 第1-3页 |
ABSTRACT | 第3-7页 |
第一章 文献综述 | 第7-21页 |
·3-羟基丙酸(3-HP)和1,3-丙二醇(1,3-PD)简介 | 第7-14页 |
·3-羟基丙酸(3-HP) | 第7-11页 |
·1,3-丙二醇 | 第11-14页 |
·甘油脱水酶、醛脱氢酶和1,3-丙二醇氧化还原酶 | 第14-19页 |
·甘油脱水酶 | 第14-18页 |
·醛脱氢酶 | 第18-19页 |
·1,3-丙二醇氧化还原酶 | 第19页 |
·本课题的研究目的及其内容 | 第19-20页 |
·本课题的研究目的 | 第19页 |
·本课题的研究内容 | 第19-20页 |
·技术路线 | 第20-21页 |
第二章 实验材料与方法 | 第21-37页 |
·实验材料 | 第21-27页 |
·菌株与质粒 | 第21-22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要设备及仪器 | 第23-24页 |
·培养基的配制 | 第24页 |
·质粒提取所需溶液的配制 | 第24-25页 |
·蛋白质浓度测定用试剂 | 第25页 |
·酶活测定用试剂的配制 | 第25-26页 |
·SDS-PAGE所需试剂的配制 | 第26-27页 |
·实验方法 | 第27-37页 |
·菌体培养 | 第27-28页 |
·考马斯亮蓝G-250 染色测定蛋白质浓度 | 第28-29页 |
·SDS—聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第29-30页 |
·甘油脱水酶酶活测定 | 第30-31页 |
·1,3-丙二醇氧化还原酶酶活测定 | 第31-32页 |
·醛脱氢酶酶活测定 | 第32页 |
·PCR反应 | 第32-34页 |
·酶切反应 | 第34页 |
·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
·琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第35页 |
·核酸的乙醇沉淀纯化、回收 | 第35页 |
·连接反应 | 第35页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
·大肠杆菌感受态细胞转化与转化子的筛选 | 第35页 |
·SDS-碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第35-37页 |
第三章 实验结果与讨论 | 第37-48页 |
·甘油脱水酶基因的克隆及表达 | 第37-40页 |
·dhaB基因的克隆 | 第37-38页 |
·dhaB基因的表达 | 第38-40页 |
·1,3-丙二醇氧化还原酶基因的克隆及表达 | 第40-43页 |
·dhaT-orfX基因的克隆 | 第40-42页 |
·dhaT-orfX基因的表达 | 第42-43页 |
·醛脱氢酶基因(ALD4)的克隆及表达 | 第43-46页 |
·ALD4 基因的克隆 | 第43-45页 |
·醛脱氢酶基因(ALD4)的表达 | 第45-46页 |
·酶活水平与文献值的比较及分析 | 第46-48页 |
第四章 结论与展望 | 第48-50页 |
·结论 | 第48-49页 |
·甘油脱水酶及其基因 | 第48页 |
·1,3-丙二醇氧化还原酶及其基因 | 第48页 |
·醛脱氢酶及其基因 | 第48页 |
·酶活水平 | 第48-49页 |
·展望 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
附录1:文中涉及到的重组质粒图谱 | 第56-58页 |
附录2:标准曲线 | 第58-59页 |
附录3:pBAD30-ALD4 测序结果 | 第59-60页 |
附录4:pET-28a(+)-dhaT-orfX测序结果 | 第60-61页 |
附录5:pET-28a(+)-dhaB测序结果 | 第61-64页 |
发表论文和科研情况说明 | 第64-65页 |
致谢 | 第65页 |