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棉花遗传转化方法与耐盐、抗除草剂基因的转化利用研究

摘要第1-13页
Abstract第13-17页
第一章 文献综述第17-47页
   ·棉花基因工程与基因转化研究进展第17-39页
     ·棉花的遗传转化方法第17-25页
       ·农杆菌介导法第18-19页
       ·基因枪法第19-20页
       ·花粉管通道法第20-24页
         ·子房注射法第21-22页
         ·真空渗透转化法第22-23页
         ·柱头滴加法第23-24页
       ·农杆枪法第24页
       ·低能离子束介导的遗传转化第24-25页
     ·棉花遗传转化的主要成就第25-28页
       ·抗虫基因工程第25页
       ·抗病基因工程第25-27页
       ·抗除草剂基因工程第27-28页
       ·纤维品种基因工程第28页
       ·抗非生物逆境基因工程第28页
     ·棉花抗除草剂基因工程及其应用第28-34页
       ·棉花主要除草剂及其除草机理第29-31页
         ·草甘膦第29-30页
         ·草丁膦第30页
         ·溴苯腈第30页
         ·2,4-D第30页
         ·阿特拉津第30-31页
         ·磺胺脲类除草剂和咪唑啉酮除草剂第31页
       ·棉花抗除草剂基因的转化第31-33页
         ·抗草甘膦棉花基因工程第31-32页
         ·抗草丁膦棉花基因工程第32页
         ·抗2,4-D棉花基因工程第32-33页
         ·抗溴苯腈棉花基因工程第33页
         ·抗其它类型除草剂棉花基因工程第33页
       ·抗除草剂转基因棉花的应用第33-34页
     ·转基因棉花外源基因的遗传与表达第34-38页
       ·外源基因的整合特征第34-35页
       ·基因沉默第35-37页
         ·基因沉默的分类第35-36页
         ·基因沉默的机制第36-37页
       ·转基因棉花的遗传稳定性与外源基因表达第37-38页
     ·棉花基因转化存在的问题第38-39页
   ·棉花耐盐性机理和遗传改良研究进展第39-46页
     ·棉花的耐盐性第39-40页
     ·棉花的耐盐机理第40-43页
       ·植株体内离子分布与平衡第40-41页
       ·活性氧清除系统与酶活性第41-42页
       ·渗透调节作用第42-43页
         ·无机渗透调节机制第42页
         ·有机渗透调节机制第42-43页
     ·棉花耐盐品种的改良第43-46页
       ·杂交育种第43页
       ·远缘杂交第43页
       ·体细胞突变体筛选第43-44页
       ·分子育种与基因工程第44-46页
   ·本论文研究内容及目的意义第46-47页
第二章 棉花转基因方法的改良及其转化效率效果的研究第47-75页
   ·材料和方法第48-58页
     ·农杆菌菌株和受体材料第48页
     ·生化试剂第48-49页
     ·培养基第49-50页
       ·细菌培养基第49页
       ·植物培养基第49-50页
     ·转化方法第50-54页
       ·农杆菌培养和质粒DNA提取第50-52页
       ·子房注射质粒DNA(方法Ⅰ)第52页
       ·花粉粒农杆菌转染法(方法Ⅱ)第52-53页
         ·花粉萌发培养基第52页
         ·转化方法第52-53页
       ·农杆菌点滴柱头法(方法Ⅲ)第53页
       ·茎尖分生组织农杆菌介导法(方法Ⅳ)第53-54页
         ·茎尖分生组织制备第53页
         ·农杆菌与茎尖分生组织共培养第53页
         ·转化植株的筛选第53-54页
         ·转化植株再生第54页
     ·转基因棉苗的筛选和鉴定第54页
     ·PCR检测第54-56页
       ·棉花DNA的快速微量提取第54-55页
       ·PCR扩增第55-56页
     ·Southern杂交检测第56-57页
       ·用于Southern杂交的高质量DNA提取第56页
       ·Southern杂交方法第56-57页
     ·农杆菌残留检测第57页
     ·转基因植株农艺性状与抗性遗传第57-58页
   ·结果与分析第58-70页
     ·Basta涂抹鉴定的可靠性评价第58-61页
       ·Basta最佳使用浓度的筛选第58-59页
       ·PCR验证第59-60页
       ·Southern验证第60-61页
       ·农杆菌残留检测第61页
     ·四种转化方法的改良效果研究第61-67页
       ·子房注射法的改良效果第61-62页
       ·花粉粒农杆菌转染法及其转化效果第62-64页
       ·农杆菌点滴柱头法及其转化效果第64-65页
       ·茎尖分生组织农杆菌介导法及其效果第65-66页
       ·不同转化方法的效率比较第66-67页
     ·转基因植株抗Basta性状的遗传分析第67-69页
     ·转Bar基因棉花农艺性状和纤维品质分析第69-70页
   ·讨论第70-75页
第三章 棉花BADH和AtNHX1基因的遗传转化及其耐盐性研究第75-103页
   ·材料与方法第77-83页
     ·受体棉花品种第77页
     ·菌株和载体质粒第77-78页
     ·相关试剂第78页
     ·试验方法第78-79页
       ·大肠杆菌质粒DNA的大量制备第78-79页
       ·基因转化方法第79页
     ·转基因棉花的初步筛选第79-80页
       ·转BADH棉花植株的卡那霉素筛选第79页
       ·转AtNHX1和BADH基因棉花的耐盐性筛选第79-80页
     ·转基因棉花的分子检测第80-82页
       ·PCR检测第80-81页
       ·转化植株的Southern杂交第81-82页
     ·转基因棉花外源基因遗传分析第82页
     ·转基因棉花耐盐性及其农艺性状鉴定第82-83页
   ·结果与分析第83-99页
     ·BADH和AtNHX1基因子房注射效果第83-84页
     ·转基因棉花植株的筛选与鉴定第84-91页
       ·卡那霉素抗性筛选第84-86页
       ·耐NaCl筛选第86页
       ·耐盐性筛选第86-87页
       ·PCR扩增和筛选第87-89页
       ·Southern杂交检测第89-91页
     ·转BADH和AtNHX1基因棉花的耐盐性鉴定第91-92页
     ·转BADH基因棉花的外源基因遗传分析第92-95页
       ·转BADH基因棉花各世代的外源基因分离情况第92-93页
       ·转BADH基因棉花外源基因遗传分析第93-95页
     ·转BADH和AtNHX1基因棉花的农艺性状和纤维品质第95-99页
       ·转基因植株T_0代调查结果第95-97页
       ·转基因植株T_1代的田间农艺性状和纤维品质调查结果第97-99页
   ·讨论第99-103页
第四章 转Bar基因种质系在杂交棉纯度控制中的利用第103-122页
   ·材料与方法第104-106页
     ·试验材料第104-105页
     ·方法第105-106页
   ·结果与分析第106-119页
     ·抗除草剂杂交组合的杂种优势表现第106-114页
     ·田间抗性鉴定除草剂浓度筛选第114-115页
     ·转Bar基因棉花在杂交棉纯度鉴定和纯度控制中的应用第115-116页
     ·不同来源的杂交棉种子纯度鉴定第116-117页
     ·种子纯度与产量表现第117-118页
     ·棉种纯度与纤维品质表现第118-119页
   ·讨论第119-122页
     ·利用抗除草剂基因进行田间控制杂交棉纯度第119-120页
     ·转Bar基因对F_1代杂种群体性状和杂种优势的影响第120-121页
     ·转Bar基因作物的安全性问题第121-122页
第五章 全文小结第122-127页
 1.农杆菌感染花粉粒转化技术的建立第122页
 2.四种不同棉花外源基因转化方法的比较第122-123页
 3.抗除草剂转Bar基因棉花种质系的创造第123页
 4.转Bar基因棉花的抗Basta遗传分析第123页
 5.转Bar基因棉花的生物学表达特性分析第123-124页
 6.转BADH基因和转AtNHX1基因耐盐棉花种材料的创造第124页
 7.转BADH基因棉花的T_1和T_2代标记基因的遗传分析第124页
 8.转BADH基因和转AtNHX1棉花的生物学表达特性分析第124-125页
 9.抗除草剂转和抗虫转基因杂交棉组合的杂种优势分析第125页
 10.转Bar基因棉花种质系在杂交棉纯度控制中的利用第125-126页
 11.本研究需要进一步改进的地方第126-127页
参考文献第127-142页
缩略词表第142-143页

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