| 第一章 绪论 | 第1-32页 |
| ·昆虫病原线虫共生细菌型变研究进展 | 第17-20页 |
| ·型变 | 第17页 |
| ·型变的可能机理 | 第17-19页 |
| ·型变的意义 | 第19-20页 |
| ·致病杆菌分子生物学研究技术 | 第20-21页 |
| ·电击转化法 | 第20页 |
| ·化学转化法 | 第20-21页 |
| ·接合转移法 | 第21页 |
| ·致病杆菌功能基因研究进展 | 第21-26页 |
| ·外膜蛋白基因 | 第22页 |
| ·菌毛蛋白基因 | 第22-23页 |
| ·共生作用相关基因 | 第23-24页 |
| ·溶血素相关基因 | 第24页 |
| ·杀虫毒素蛋白基因 | 第24-25页 |
| ·专利保护基因 | 第25-26页 |
| ·功能未知基因 | 第26页 |
| ·致病杆菌抗菌代谢产物研究进展 | 第26-30页 |
| ·致病杆菌抗菌代谢物的抑菌活性 | 第26-27页 |
| ·致病杆菌的抗菌代谢物质 | 第27-30页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第30-32页 |
| ·立题依据 | 第30页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 嗜线虫致病杆菌北京变种Ⅰ型菌株质粒转化体系的研究 | 第32-59页 |
| ·北京变种的抗生素抗性研究 | 第32-37页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·抗生素浓度梯度的配制 | 第33页 |
| ·抗生素抗性的测定 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·氯霉素抗性测定 | 第34页 |
| ·卡那霉素抗性测定 | 第34页 |
| ·链霉素抗性测定 | 第34-35页 |
| ·新霉素抗性测定 | 第35页 |
| ·青霉素抗性测定 | 第35-36页 |
| ·氨苄青霉素抗性测定 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·不同转化方法对北京变种Ⅰ型菌株生理生化特性的影响 | 第37-46页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·化学转化用感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·化学转化用感受态细胞的空白转化 | 第38页 |
| ·电击转化用感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·电击转化用感受态细胞的空白转化 | 第39页 |
| ·接合转移用感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·接合转移用感受态细胞的空白转化 | 第39页 |
| ·菌落对色素的吸收 | 第39-40页 |
| ·菌落在API试条的反应 | 第40页 |
| ·菌落过氧化氢酶活性测定 | 第40页 |
| ·菌落生长曲线的制定 | 第40页 |
| ·菌落抑菌活性的测定 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·不同转化方法对北京变种卡那霉素抗性的影响 | 第40-41页 |
| ·不同转化方法对北京变种色素吸收的影响 | 第41页 |
| ·不同转化方法对北京变种细胞内代谢作用的影响 | 第41-43页 |
| ·不同转化方法对北京变种过氧化氢酶活性的影响 | 第43页 |
| ·不同转化方法对北京变种生长曲线的影响 | 第43-44页 |
| ·不同转化方法对北京变种抑菌活性的影响 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·转化操作对北京变种卡那霉素抗性的影响 | 第44-45页 |
| ·不同转化方法对北京变种生理生化特性的影响 | 第45-46页 |
| ·外源质粒导入对北京变种生理生化特性的影响 | 第46-59页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·供体质粒和帮助质粒在感受态细胞的电击转化 | 第47页 |
| ·质粒在北京变种中的接合转移 | 第47-48页 |
| ·转移接合子的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·转移接合子中质粒的提取 | 第49页 |
| ·转移接合子对色素的吸收 | 第49页 |
| ·转移接合子过氧化氢酶活性的测定 | 第49页 |
| ·转移接合子在API试条的反应 | 第49页 |
| ·转移接合子生长曲线的制定 | 第49页 |
| ·转移接合子抑菌活性的测定 | 第49页 |
| ·转移接合子氯霉素抗性的测定 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-57页 |
| ·供体质粒和帮助质粒在大肠杆菌的转化 | 第50页 |
| ·质粒在嗜线虫致病杆菌北京变种的接合转移 | 第50-51页 |
| ·转移接合子的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·转移接合子质粒的稳定性 | 第52页 |
| ·转移接合子对色素的吸收 | 第52-53页 |
| ·转移接合子的代谢及生化特征 | 第53-54页 |
| ·转移接合子的生长曲线变化 | 第54-55页 |
| ·转移接合子的抑菌活性 | 第55-56页 |
| ·pSZ21转移接合子的氯霉素抗性 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·北京变种遗传转化体系的构建 | 第57页 |
| ·外源质粒导入对北京变种Ⅰ型菌株代谢的影响 | 第57-58页 |
| ·pSZ21转化接合子的抑菌活性降低不一定由Tn5转座引起 | 第58-59页 |
| 第三章 嗜线虫致病杆菌北京变种抗生素抗性相关基因的研究 | 第59-92页 |
| ·抗生素相关基因xbl的克隆与序列分析 | 第59-68页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·引物设计和合成 | 第60页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株基因片段的PCR扩增 | 第60页 |
| ·PCR产物的纯化、连接和转化 | 第60-62页 |
| ·阳性克隆的确定 | 第62页 |
| ·序列测定 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-66页 |
| ·xbl基因片段的PCR扩增 | 第62-63页 |
| ·xbl基因片段的测序 | 第63页 |
| ·xbl基因片段的序列分析 | 第63-66页 |
| ·xbl基因序列在Genbank中的注册 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·氨苄青霉素水解活性肽段XBL-AH的表达与纯化 | 第68-85页 |
| ·实验材料 | 第68-70页 |
| ·实验方法 | 第70-74页 |
| ·表达载体的构建及诱导表达 | 第70-71页 |
| ·蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第71-72页 |
| ·Western blotting | 第72页 |
| ·包涵体的纯化、变性与复性 | 第72-73页 |
| ·蛋白含量测定 | 第73页 |
| ·氨苄青霉素水解活性测定 | 第73-74页 |
| ·诱导表达XBL-AH的蛋白纯化 | 第74页 |
| ·ELISA检测 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-83页 |
| ·xbl-ah基因编码氨基酸的结构预测 | 第74-76页 |
| ·xbl-ah基因的PCR扩增 | 第76页 |
| ·携带北京变种xbl-ah基因的质粒pET28AH的构建 | 第76-78页 |
| ·重组表达载体pET28AH的诱导表达 | 第78-80页 |
| ·XBL-AH包涵体的鉴定 | 第80-81页 |
| ·XBL-AH包涵体的变性与复性 | 第81页 |
| ·XBL-AH表达产物的氨苄青霉素水解活性 | 第81-82页 |
| ·XBL-AH表达产物的进一步纯化 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·XBL-AH表达产物包涵体的形成 | 第83页 |
| ·XBL-AH包涵体的复性与纯化 | 第83页 |
| ·抗生素相关基因片段xbl-ah的意义 | 第83-85页 |
| ·北京变种xbl-ah基因的分布 | 第85-92页 |
| ·实验材料 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株基因组DNA的提取 | 第86-87页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株质粒DNA的提取 | 第87页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株质粒在大肠杆菌中的转化 | 第87页 |
| ·抗生素抗性测定 | 第87页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株基因组和质粒中xbl-ah基因的PCR扩增 | 第87-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-90页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株基因组DNA的提取 | 第88页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株质粒DNA的提取 | 第88-89页 |
| ·质粒pBJ-1在大肠杆菌中的转化 | 第89页 |
| ·质粒pBJ-1的抗生素抗性测定 | 第89页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌株xbl-ah基因的定位 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| ·北京变种Ⅰ型菌质粒pBJ-1的发现 | 第90页 |
| ·抗生素抗性的起源与进化 | 第90-92页 |
| 第四章 结论与展望 | 第92-95页 |
| ·结论 | 第92页 |
| ·创新点 | 第92-93页 |
| ·展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
