| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-40页 |
| ·FGFs及FGFRs的概述 | 第10-27页 |
| ·FGFRs的结构多样性 | 第10-13页 |
| ·FGF和FGFR的相互作用 | 第13-15页 |
| ·FGFRs二聚化的两种模式假说 | 第15-17页 |
| ·FGF/FGFR的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·FGF/FGFR与肿瘤 | 第18-20页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的突变 | 第20-26页 |
| ·FGFR胞外段有可能成为治疗肿瘤的药物 | 第26-27页 |
| ·包涵体的概述 | 第27-31页 |
| ·包涵体的定义、组成与特性 | 第27-28页 |
| ·包涵体的形成 | 第28-29页 |
| ·减少包涵体形成的策略 | 第29-30页 |
| ·包涵体的获得 | 第30-31页 |
| ·包涵体的复性 | 第31-35页 |
| ·蛋白质的折叠机理 | 第31-32页 |
| ·包涵体蛋白复性策略 | 第32-33页 |
| ·影响复性效率的环境因素 | 第33-34页 |
| ·复性效果的检测方法 | 第34-35页 |
| ·本实验使用的表达载体介绍 | 第35-36页 |
| ·pET3c介绍 | 第35-36页 |
| ·本研究的的目的与主要内容 | 第36-40页 |
| ·本研究的意义 | 第36-38页 |
| ·主要的研究思路 | 第38-39页 |
| ·主要研究路线和内容 | 第39-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-53页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第41-45页 |
| ·组织 | 第41页 |
| ·菌株及质粒 | 第41页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第41页 |
| ·常用试剂 | 第41-43页 |
| ·试剂配方 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-53页 |
| ·质粒小提试剂盒抽提质粒DNA | 第45页 |
| ·DNA的酶切 | 第45页 |
| ·DNA cycle-pure试剂盒纯化酶切产物 | 第45-46页 |
| ·Ligation DNA连接酶进行体外连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第46页 |
| ·转化子的鉴定 | 第46页 |
| ·从组织中提取总RNA | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE | 第47页 |
| ·银染 | 第47-48页 |
| ·免疫印迹 | 第48页 |
| ·大肠杆菌转化子的表达 | 第48-49页 |
| ·菌体破碎和包涵体清洗 | 第49页 |
| ·包涵体变性及凝胶层析纯化 | 第49-50页 |
| ·包涵体复性 | 第50-51页 |
| ·rβBFGFP2IIIc蛋白纯化 | 第51页 |
| ·凝胶柱HPLC | 第51页 |
| ·表达产物的生物活性测定 | 第51-53页 |
| 第三章 FGFR2Ⅲc胞外段基因的克隆及点突变 | 第53-73页 |
| ·FGFR2Ⅲc cDNA的获取及克隆 | 第53-59页 |
| ·从人胎盘组织中提取总RNA | 第53页 |
| ·两步法扩增FGFR2Ⅲc胞外段基因 | 第53-56页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第57-59页 |
| ·βFGFR2Ⅲc的全基因合成及表达载体的构建 | 第59-65页 |
| ·βFGFR2Ⅲc的全基因合成 | 第59-63页 |
| ·全基因合成产物的重组子鉴定 | 第63-65页 |
| ·β FGFR2Ⅲc突变型的构建 | 第65-67页 |
| ·重叠延伸PCR进行βFGFR2Ⅲc的定点突变 | 第66-67页 |
| ·aFGFR2Ⅱc的重叠延伸合成与构建 | 第67-69页 |
| ·重叠延伸PCR合成aFGFR2Ⅱc及其突变型 | 第68-69页 |
| ·本章小节与讨论 | 第69-73页 |
| ·两步法RT-PCR结合巢式PCR扩增FGFR2 | 第69-70页 |
| ·βFGFR2Ⅲc的全基因合成 | 第70-71页 |
| ·βFGFR2Ⅲc的定点突变及aFGFR2Ⅲc的合成 | 第71-73页 |
| 第四章 rhβFGFR2Ⅲc的大肠杆菌表达及包涵体复性 | 第73-88页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc在BL21(+)中的诱导表达 | 第73-75页 |
| ·鉴定rhβFGFR2Ⅲc存在于包涵体 | 第75页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc的清洗 | 第75-76页 |
| ·凝胶层析纯化rhβFGFR2Ⅲc | 第76页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc的复性 | 第76-83页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc的稀释法复性 | 第77-78页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc的透析法复性 | 第78-80页 |
| ·透析法结合肝素亲和层析的两步法复性 | 第80-81页 |
| ·凝胶层析复性 | 第81-82页 |
| ·复性产物的纯化 | 第82-83页 |
| ·本章小结与讨论 | 第83-88页 |
| ·rhβFGFR2Ⅲc的表达 | 第83-84页 |
| ·rhⅡFGFR2Ⅲc的复性 | 第84-88页 |
| 第五章 活性测定 | 第88-95页 |
| ·免疫共沉淀法检测rhβFGFR2Ⅲc与FGF2的结合 | 第88-91页 |
| ·MTT法检测rhβFGFR2Ⅲc对FGF2促有丝分裂活性的抑制作用 | 第91-92页 |
| ·小结与讨论 | 第92-95页 |
| ·FGFR2Ⅲc与FGF-2之间的特异性结合分析 | 第92-93页 |
| ·FGFR2Ⅲc抑制FGF-2促细胞分裂活性的结果分析 | 第93-95页 |
| 第六章 总结与展望 | 第95-99页 |
| ·本实验的总结 | 第95-96页 |
| ·上游构建工作 | 第95页 |
| ·表达及复性 | 第95-96页 |
| ·活性检测 | 第96页 |
| ·本实验的展望 | 第96-99页 |
| ·本实验构建的其余的FGFR2 | 第96-97页 |
| ·原核表达的条件优化以及大规模发酵的探索 | 第97页 |
| ·重组BFGFR2Ⅲc胞外段蛋白的稳定性研究 | 第97页 |
| ·重组BFGFR2Ⅲc胞外段蛋白进一步的功能研究 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 附录 | 第104-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
