猪戊型肝炎病毒基因AG02的融合表达及间接ELISA诊断的初步建立
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-19页 |
| ·戊型肝炎概述 | 第9-12页 |
| ·戊型肝炎的病原学 | 第9-10页 |
| ·戊型肝炎病毒的分子生物学 | 第10-11页 |
| ·戊型肝炎病毒基因分型研究 | 第11-12页 |
| ·戊型肝炎的流行病学 | 第12-13页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第13-14页 |
| ·诊断 | 第14-15页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第14页 |
| ·PCR方法 | 第14页 |
| ·血清中和实验 | 第14-15页 |
| ·免疫荧光试验(IFA) | 第15页 |
| ·免疫印迹(IB) | 第15页 |
| ·免疫电镜(IEM) | 第15页 |
| ·戊型肝炎的研究进展 | 第15-18页 |
| ·HEV抗原表位的研究 | 第16-17页 |
| ·疫苗的研究 | 第17页 |
| ·目前存在的问题 | 第17-18页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·抗体 | 第19页 |
| ·质粒与菌株 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-25页 |
| ·HEV cDNA模板的获得 | 第20-21页 |
| ·HEV ORF2基因片段的克隆与扩增 | 第21-22页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·阳性重组质粒的表达 | 第23-24页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第24-25页 |
| ·间接ELISA程序的建立 | 第25-27页 |
| ·ELISA试剂配制 | 第25-26页 |
| ·方阵滴定实验确定抗原和血清的包被浓度 | 第26页 |
| ·酶标抗体工作浓度的确定 | 第26页 |
| ·重组蛋白抗原的包被条件的确定 | 第26页 |
| ·血清和酶标二抗反应时间的确定 | 第26页 |
| ·底物作用时间 | 第26页 |
| ·包被液的选择 | 第26页 |
| ·稀释液的选择 | 第26-27页 |
| ·阴阳性临界值的判断 | 第27页 |
| ·ELISA工作性质确定 | 第27页 |
| ·阻断试验 | 第27页 |
| ·敏感性试验 | 第27页 |
| ·重复性试验 | 第27页 |
| ·稳定性试验 | 第27页 |
| ·重组抗原的应用 | 第27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-37页 |
| ·AG02基因的扩增结果 | 第28页 |
| ·AG02测序结果及分析 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒PET-HEV的鉴定 | 第29页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·Western blot分析 | 第30页 |
| ·ELISA最佳工作条件的确定 | 第30-34页 |
| ·抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第30-31页 |
| ·酶标抗体工作浓度的确定 | 第31页 |
| ·重组蛋白抗原的包被条件的确定 | 第31-32页 |
| ·血清和酶标二抗反应时间的确定 | 第32-33页 |
| ·底物作用时间 | 第33页 |
| ·包被液的选择 | 第33-34页 |
| ·封闭液的选择 | 第34页 |
| ·稀释液的选择 | 第34页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第34页 |
| ·ELISA工作性质分析 | 第34-36页 |
| ·阻断试验 | 第34页 |
| ·敏感性试验 | 第34-35页 |
| ·重复性试验 | 第35页 |
| ·稳定性试验 | 第35-36页 |
| ·重组抗原的应用 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 独创性声明 | 第43页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第43页 |
