| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1.前言—文献综述 | 第10-46页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的研究进展 | 第10-23页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)简介 | 第10-12页 |
| ·什么是蛋白内含子(内含肽) | 第10页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的发现 | 第10-11页 |
| ·Intein和Extein名词的来历 | 第11页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)剪接和RNA剪接的对比 | 第11-12页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的分布,类型和结构 | 第12-16页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的分布 | 第12-13页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的类型 | 第13页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的结构 | 第13-15页 |
| ·分离的蛋白内含子(内含肽) | 第15页 |
| ·三维结构比较 | 第15-16页 |
| ·如何识别新的内含肽 | 第16页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的剪接机制 | 第16-18页 |
| ·体外实验体系促进分支蛋白质中间产物的发现 | 第16-17页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)剪接机制 | 第17-18页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的自导和水平转移 | 第18-20页 |
| ·自导作用 | 第18-19页 |
| ·自导作用中的有性结合和水平转移 | 第19-20页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的起源和宿主偏爱 | 第20-21页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的起源 | 第20页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)的宿主偏爱 | 第20-21页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)在生物技术上的应用 | 第21-23页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第21-22页 |
| ·毒素蛋白的合成 | 第22页 |
| ·结构分析 | 第22页 |
| ·药物学应用 | 第22页 |
| ·蛋白质相互作用和活性位点剖析的研究 | 第22-23页 |
| ·转基因植物上的应用 | 第23页 |
| ·小结 | 第23页 |
| ·蓝细菌异形胞的发育机制 | 第23-35页 |
| ·蓝细菌背景介绍 | 第23-24页 |
| ·蓝细菌异形胞的特征 | 第24-26页 |
| ·异形胞的形态特征 | 第24-25页 |
| ·异形胞的功能特征 | 第25页 |
| ·蓝细菌氮源利用调节 | 第25-26页 |
| ·异形胞的的发育机制 | 第26-35页 |
| ·异形胞发育的调控 | 第27-29页 |
| ·异形胞空间分布模式的调控 | 第29-31页 |
| ·3 调控异形胞包被形成的基因 | 第31页 |
| ·异形胞特异性染色体重排 | 第31-34页 |
| ·异形胞代谢的调控 | 第34-35页 |
| ·细胞分裂和分化 | 第35-42页 |
| ·Escherichia.coli染色体复制 | 第36-37页 |
| ·Caulobacter crescentus的发育 | 第37-40页 |
| ·Bacillus subtilis的芽孢分化 | 第40-42页 |
| ·研究目的和意义 | 第42-46页 |
| 2.材料和方法 | 第46-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·培养基配方以及培养条件 | 第46-47页 |
| ·常用贮存液和缓冲液配方 | 第47-49页 |
| ·贮存液 | 第47-48页 |
| ·缓冲液 | 第48-49页 |
| ·常用缓冲溶液 | 第48页 |
| ·质粒DNA小量制备的碱裂解缓冲液 | 第48-49页 |
| ·主要的分子生物学试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-68页 |
| ·Anabaena PCC 7120基因组中DNA聚合酶基因的查找与分析 | 第49-50页 |
| ·Anabaena PCC 7120中的DNA聚合酶查找 | 第49-50页 |
| ·Anabaena PCC 7120总DNA的抽提 | 第50页 |
| ·大量抽提总DNA | 第50页 |
| ·小量抽提总DNA | 第50页 |
| ·Anabaena PCC 7120异形胞的诱导和分离 | 第50-51页 |
| ·异形胞的常规分离 | 第50-51页 |
| ·异形胞的快速分离 | 第51页 |
| ·质粒DNA的制备及其基本操作 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的大量(少量)提取 | 第51页 |
| ·质粒DNA的操作 | 第51-52页 |
| ·质粒DNA去磷酸化 | 第52页 |
| ·转化 | 第52-54页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第52页 |
| ·大肠杆菌表达宿主细胞的转化 | 第52页 |
| ·Anabaena PCC 7120通过三亲本杂交进行基因转移 | 第52-54页 |
| ·PCR介导的dnaA基因的体外定点突变 | 第54-55页 |
| ·dnaENI和dnaECI的启动子与报告基因gfp融合载体的构建 | 第55页 |
| ·重组融合表达质粒的构建 | 第55-56页 |
| ·蛋白质的表达和纯化 | 第56-60页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·蛋白质表达产物的小量制备 | 第57-58页 |
| ·蛋白质表达产物的大量制备 | 第58-59页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第59页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第59-60页 |
| ·抗血清的制备和纯化 | 第60-63页 |
| ·家兔的免疫 | 第60-61页 |
| ·抗血清的收集和保存 | 第61-62页 |
| ·抗体的纯化 | 第62-63页 |
| ·Anabaena PCC 7120中蛋白质的制备和定量 | 第63-65页 |
| ·营养细胞中蛋白质的提取 | 第63-64页 |
| ·异形胞及两种类型混合的细胞的蛋白质提取 | 第64页 |
| ·蛋白质定量 | 第64-65页 |
| ·Western Blotting | 第65-68页 |
| ·蛋白质印迹：从SDS—PAGE向硝酸纤维素膜上进行半干式转移 | 第65-66页 |
| ·免疫杂交 | 第66页 |
| ·PVDF印迹 | 第66-68页 |
| 3.结果与分析 | 第68-93页 |
| ·Anabaena PCC 7120中DNA复制蛋白质或酶的生物信息学分析 | 第68-72页 |
| ·DNA复制过程中涉及到的蛋白质或酶的比较分析 | 第68-70页 |
| ·蛋白内含子(内含肽)在Anabaena PCC 7120染色体上的分布 | 第70-71页 |
| ·Anabaena PCC 7120和Synechocystis PCC 6803的DnaE／dnaE之间的比较 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第72-78页 |
| ·DnaA蛋白质的表达 | 第72页 |
| ·不同的DnaE多肽的表达 | 第72-78页 |
| ·DnaENI'和DnaECI'重组融合表达质粒的构建 | 第73-75页 |
| ·DnaENI'和DnaECI'双重组融合表达质粒的构建 | 第75-76页 |
| ·成熟的DnaE重组表达质粒的构建 | 第76-77页 |
| ·不同的DnaE多肽的表达 | 第77-78页 |
| ·抗血清的制备和纯化 | 第78-79页 |
| ·Anabaena PCC 7120中DnaE蛋白内含子的体外反式剪接 | 第79-81页 |
| ·DnaE蛋白内含子的体外反式剪接 | 第79-80页 |
| ·DnaE蛋白内含子在大肠杆菌体内的反式剪接 | 第80-81页 |
| ·Anabaena PCC 7120中DnaE蛋白内含子的体内反式剪接 | 第81-84页 |
| ·DnaE蛋白内含子的体内反式剪接 | 第81页 |
| ·DnaE蛋白内含子在两种不同类型细胞内的反式剪接 | 第81-82页 |
| ·DnaE蛋白在Anabaena PCC 7120细胞中的存在形式 | 第82-84页 |
| ·DnaE蛋白在Anabaena PCC 7120营养细胞中的存在形式 | 第82-83页 |
| ·DnaENI蛋白在Anabaena PCC 7120两种类型细胞中的存在 | 第83-84页 |
| ·dnaENI和dnaECI在Anabaena PCC 7120中的转录分析 | 第84-88页 |
| ·dnaENI和dnaECI在营养细胞内的转录分析 | 第86-87页 |
| ·dnaENI和dnaECl在异形胞中的转录分析 | 第87-88页 |
| ·Anabaena PCC 7120中DnaA蛋白在异形胞中的表达 | 第88页 |
| ·Anabaena PCC 7120温度敏感型的筛选 | 第88-93页 |
| ·Anabaena PCC 7120与E. coli的DnaA蛋白质序列比较 | 第89-90页 |
| ·引物的设计 | 第90-91页 |
| ·高保真PCR | 第91页 |
| ·突变的dnaA基因克隆到pBluescript SK上 | 第91页 |
| ·突变的dnaA基因插入到整合质粒pRL271中 | 第91-92页 |
| ·温度敏感型突变株的筛选 | 第92-93页 |
| 4.讨论 | 第93-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
