| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一部分 研究进展 | 第16-69页 |
| 第一章 单纯疱疹病毒与单纯疱疹病毒载体 | 第16-34页 |
| ·单纯疱疹病毒的生物学特性 | 第16-25页 |
| ·单纯疱疹病毒载体 | 第25-34页 |
| ·非复制型1 型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体 | 第26-29页 |
| ·扩增子 | 第26-27页 |
| ·复制缺陷型载体 | 第27-29页 |
| ·复制型单纯疱疹病毒载体（溶瘤病毒载体） | 第29-32页 |
| ·单纯疱疹病毒载体的应用 | 第32-34页 |
| 第二章 溶瘤病毒与肿瘤基因治疗 | 第34-59页 |
| ·肿瘤基因治疗概述 | 第35-37页 |
| ·溶瘤病毒(复制型溶瘤病毒) | 第37-57页 |
| ·溶瘤病毒概述 | 第37页 |
| ·理想的溶瘤病毒的特征及来源 | 第37-38页 |
| ·溶瘤病毒杀灭肿瘤细胞的一般机制 | 第38-40页 |
| ·溶瘤病毒特异增殖的机制 | 第40-47页 |
| ·溶瘤病毒的肿瘤选择性感染 | 第40-41页 |
| ·溶瘤病毒的肿瘤选择性复制 | 第41-45页 |
| ·采用肿瘤/组织特异性启动子调控病毒复制 | 第45-46页 |
| ·其它的肿瘤靶向策略 | 第46-47页 |
| ·溶瘤病毒抗癌特异性 | 第47-48页 |
| ·病毒溶瘤作用产生的免疫反应 | 第48-49页 |
| ·溶瘤病毒技术进展 | 第49-50页 |
| ·溶瘤病毒治疗同传统的化疗或放疗联合 | 第49页 |
| ·携带细胞毒性基因提高溶瘤病毒效率 | 第49-50页 |
| ·常见的几种溶瘤病毒及应用 | 第50-57页 |
| ·条件复制型溶瘤腺病毒 | 第51-52页 |
| ·条件复制型溶瘤单纯疱疹病毒 HSV-1 | 第52-54页 |
| ·条件复制型溶瘤痘病毒 | 第54页 |
| ·新城疫病毒 NDV | 第54页 |
| ·溶瘤呼肠孤病毒 | 第54-56页 |
| ·其它的溶瘤病毒 | 第56-57页 |
| ·结语 | 第57-59页 |
| 第三章 本研究的已有基础以及研究目的和意义 | 第59-69页 |
| ·关于mtHSV 的研究成果 | 第59-62页 |
| ·关于mtHSV 的构建以及细胞和小鼠水平的杀瘤效应 | 第59-60页 |
| ·关于mtHSV 对荷人肝癌 Hep-3B 裸鼠的杀瘤实验 | 第60-62页 |
| ·关于腺病毒的研究成果 | 第62-67页 |
| ·关于非复制型腺病毒的研究成果 | 第62-65页 |
| ·关于复制型腺病毒的研究成果 | 第65-67页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第67-69页 |
| 第二部分 研究工作 | 第69-133页 |
| 第四章 Ras/RTN3 介导溶瘤单纯疱疹病毒mtHSV 侵染 HeLa 细胞 | 第69-96页 |
| ·前言 | 第69-71页 |
| ·材料和方法 | 第71-84页 |
| ·病毒、菌株、细胞和试剂 | 第71-72页 |
| ·载体 | 第72页 |
| ·细胞培养 | 第72-73页 |
| ·细胞冻存 | 第73页 |
| ·细胞复苏 | 第73页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第73-75页 |
| ·质粒 DNA 的小量制备 | 第73-74页 |
| ·质粒 DNA 的大量提取 | 第74-75页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶法回收 DNA 片段 | 第75-76页 |
| ·DNA 操作 | 第76-77页 |
| ·DNA 片段和载体的连接 | 第76页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第76页 |
| ·质粒 DNA 的转化 | 第76-77页 |
| ·菌种的保存 | 第77-78页 |
| ·菌落 PCR | 第78页 |
| ·质粒 DNA 转染 | 第78页 |
| ·亚细胞组分的制备：从细胞中分离细胞质膜和内质网组分 | 第78-79页 |
| ·人法尼基转移酶(FTase) siRNA 靶序列的选择 | 第79页 |
| ·MTT 分析 | 第79-80页 |
| ·细胞表面蛋白的流式细胞术定量检测 | 第80页 |
| ·激光共聚焦荧光定位 | 第80-81页 |
| ·免疫共沉淀 | 第81-82页 |
| ·Western blot 分析 | 第82-83页 |
| ·抗体的制备 | 第83页 |
| ·免疫荧光分析 | 第83-84页 |
| ·统计学分析 | 第84页 |
| ·研究结果 | 第84-94页 |
| ·载体的构建 | 第84-86页 |
| ·载体siFTa,siFTb,siFTc 的构建 | 第85页 |
| ·载体pASRed2C1-RTN3 的构建 | 第85页 |
| ·载体pAdtrackCMV-ras 的构建 | 第85页 |
| ·载体pCMVTa928-ras 的构建 | 第85-86页 |
| ·mtHSV 能有效裂解 HeLa 细胞 | 第86页 |
| ·mtHSV 感染的 Hela 细胞中 Ras 和 RTN3 的表达 | 第86-88页 |
| ·mtHSV 感染 Hela 细胞后 Ras 和 RTN3 在细胞质膜和内质网上的表达. | 第88-89页 |
| ·Ras 和 RTN3 蛋白的共定位 | 第89-90页 |
| ·Ras 和 RTN3 蛋白的相互作用 | 第90页 |
| ·siRNA 沉默了 Hela 细胞中 Ras 和RTN3 蛋白的表达 | 第90-92页 |
| ·siFTa and siRTN3 能有效的杀死 Hela 细胞 | 第92-93页 |
| ·siFTa and siRTN3 有效抑制了mtHSV 对 Hela 细胞的侵染 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| 第五章 mtHSV 引起 HeLa 细胞死亡：凋亡？裂解？ | 第96-106页 |
| ·前言 | 第96-97页 |
| ·材料和方法 | 第97-100页 |
| ·病毒、菌株、细胞和试剂 | 第97页 |
| ·细胞培养 | 第97页 |
| ·细胞冻存 | 第97页 |
| ·细胞复苏 | 第97-98页 |
| ·Hoechst 33258 染色 | 第98页 |
| ·DNA 提取及琼脂糖凝胶电泳分析 | 第98页 |
| ·Annexin V/PI 双染法 | 第98-99页 |
| ·细胞表面蛋白的流式细胞术定量检测 | 第99页 |
| ·Western blot 分析 | 第99页 |
| ·激光共聚焦蛋白质免疫荧光定位 | 第99-100页 |
| ·统计学分析 | 第100页 |
| ·研究结果 | 第100-105页 |
| ·mtHSV感染Hela细胞后P53蛋白的表达 | 第100-102页 |
| ·mtHSV感染后P53蛋白在Hela和Hep3B细胞内的定位 | 第102-103页 |
| ·mtHSV 感染 Hela 细胞不诱发 Hela 细胞核形态改变 | 第103页 |
| ·mtHSV 感染 Hela 细胞不诱发 Hela 细胞 DNA 片断化 | 第103-104页 |
| ·流式细胞术(Annexin V/PI双染)检测结果 | 第104-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| 第六章 重组单纯疱疹病毒相互作用蛋白 RasGRP2 的筛选、克隆及功能鉴定 | 第106-133页 |
| ·前言 | 第106-107页 |
| ·材料与方法 | 第107-118页 |
| ·病毒、菌株、细胞和试剂 | 第107-108页 |
| ·文库 | 第108页 |
| ·病毒的增殖、分离和提纯 | 第108-110页 |
| ·病毒的大量制备与纯化 | 第108-109页 |
| ·病毒空斑测定 | 第109-110页 |
| ·噬菌体文库筛选 | 第110-112页 |
| ·噬菌体十五肽文库的扩增 | 第110页 |
| ·从培养液中提纯病毒粒子 | 第110-111页 |
| ·制备饥饿态细胞 | 第111页 |
| ·筛选过程 | 第111页 |
| ·滴定 | 第111-112页 |
| ·ELISA | 第112页 |
| ·PCR | 第112-113页 |
| ·巢式 PCR | 第112-113页 |
| ·菌落 PCR | 第113页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第113页 |
| ·质粒 DNA 的小量制备 | 第113页 |
| ·质粒 DNA 的大量提取 | 第113页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶法回收DNA 片段 | 第113-114页 |
| ·重组质粒的构建 | 第114页 |
| ·重组质粒DNA 的转座 | 第114页 |
| ·重组 Bacmid DNA(>100kb)的提取与制备 | 第114-115页 |
| ·RasGRP2 的真核表达及纯化 | 第115-117页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第117页 |
| ·Western blot 分析 | 第117页 |
| ·DNA 操作 | 第117-118页 |
| ·细胞培养 | 第118页 |
| ·质粒DNA 转染 | 第118页 |
| ·RasGRP2 蛋白的跨膜区预测 | 第118页 |
| ·病毒吸附感染 | 第118页 |
| ·研究结果 | 第118-132页 |
| ·病毒的增殖、分离和提纯 | 第118页 |
| ·重组单纯疱疹病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第118-126页 |
| ·载体和重组杆状病毒的构建 | 第126-127页 |
| ·载体pAdtrackCMV-RasGRP2 的构建 | 第126页 |
| ·载体 AcBacmid-RasGRP2 和重组 AcNPV vAc－RasGRP2 的构建 | 第126-127页 |
| ·RasGRP2 蛋白的表达 | 第127-129页 |
| ·RasGRP2 蛋白的跨膜区预测结果 | 第129-131页 |
| ·转染pAdtrackCMV RasGRP2 的NIH3T3 细胞可以被mtHSV 和 HSV-1 感染 | 第131-132页 |
| ·讨论 | 第132-133页 |
| 研究总结 | 第133-136页 |
| 本文的创新点 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-154页 |
| 攻读博士学位期间发表和待发表的文章 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156-158页 |
