| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-33页 |
| 第一章 噬菌体展示抗体的研究进展 | 第14-20页 |
| 1 丝状噬菌体的生物学特点 | 第14-15页 |
| 2 噬菌体展示技术 | 第15-16页 |
| 3 噬菌体抗体库技术 | 第16-18页 |
| ·噬菌体抗体库技术在人源抗体制备中的应用 | 第16页 |
| ·应用噬菌体抗体库技术改良抗体性能 | 第16-18页 |
| ·改善scFv接头的功能 | 第17页 |
| ·提高抗体的表达量 | 第17页 |
| ·改善抗体分子的特异性。 | 第17-18页 |
| ·不经免疫制备抗体 | 第18页 |
| 4 结语 | 第18页 |
| 参考文献 | 第18-20页 |
| 第二章 EB病毒转化B淋巴细胞形成的主要病毒蛋白及永生化细胞系在医学上的应用 | 第20-26页 |
| 1 EBV的生物学特性 | 第20页 |
| 2 EBV的穿膜机制 | 第20-21页 |
| 3 EBV转化B淋巴细胞形成的主要病毒蛋白 | 第21-22页 |
| ·EBNA-1 | 第21页 |
| ·EBNA-2 | 第21-22页 |
| ·EBNA-3A、-3C | 第22页 |
| ·EBNA-LP | 第22页 |
| ·LMP1 | 第22页 |
| 4 B-LCL的应用 | 第22-23页 |
| ·在制备血型抗体中的应用 | 第22-23页 |
| ·在临床肿瘤、疾病中的研究 | 第23页 |
| ·其它应用 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-26页 |
| 第三章 抗Rh(D)血型抗体制备的研究进展 | 第26-33页 |
| 1 多克隆抗Rh(D)抗体 | 第26页 |
| 2 单克隆抗Rh(D)抗体 | 第26-28页 |
| ·人-人、人-鼠杂交瘤技术制备单克隆抗Rh(D)抗体 | 第27页 |
| ·EBV转化技术制备单克隆抗Rh(D)抗体 | 第27页 |
| ·EBV转化技术联合杂交瘤技术制备单克隆抗Rh(D)抗体 | 第27-28页 |
| 3 基因工程抗Rh(D)抗体 | 第28-30页 |
| ·小分子抗体 | 第28页 |
| ·双价抗体及双链抗体 | 第28-29页 |
| ·抗体融合蛋白 | 第29页 |
| ·核糖体展示技术制备抗Rh(D)抗体的展望 | 第29-30页 |
| 4 结语 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-33页 |
| 第二部分 实验研究 | 第33-62页 |
| 第四章 血型A抗原特异性B淋巴细胞永生细胞系的建立 | 第33-38页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| ·全血标本 | 第33页 |
| ·实验材料和试剂 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-35页 |
| ·EBV悬液的制备 | 第34页 |
| ·外周血B淋巴细胞的分离 | 第34页 |
| ·EBV转化B淋巴细胞 | 第34页 |
| ·红细胞凝集试验 | 第34页 |
| ·细胞的冻存 | 第34页 |
| ·细胞的复苏 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35页 |
| ·永生化B细胞系的建立 | 第35页 |
| ·培养上清的抗体检测 | 第35页 |
| ·永生化B细胞的冻存与复苏 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第五章 抗红细胞血型A抗原人源噬菌体抗体库的研究 | 第38-50页 |
| 1 实验材料 | 第38-41页 |
| ·实验材料和试剂 | 第38页 |
| ·主要实验仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂的配置 | 第39-40页 |
| ·实验设计 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-45页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第41页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第41页 |
| ·PCR扩增抗体基因 | 第41-42页 |
| ·SOE拼接scFv抗体基因 | 第42页 |
| ·scFv基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·scFv基因的鉴定 | 第43页 |
| ·scFv抗体库的构建 | 第43页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第43-44页 |
| ·单克隆噬菌体抗体的制备 | 第44页 |
| ·特异性噬菌体抗体的初步鉴定 | 第44页 |
| ·抗人红细胞活性检测 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| ·细胞总RNA的鉴定 | 第45页 |
| ·scFv基因扩增产物的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组噬菌体质粒的酶切鉴定及PCR验证 | 第46-47页 |
| ·噬菌体抗体库的建立 | 第47页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选及初步鉴定 | 第47页 |
| ·噬菌体抗体的鉴定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 第六章 人源抗Rh(D)单链噬菌体抗体库的构建及鉴定 | 第50-62页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| ·实验材料和试剂 | 第50页 |
| ·主要实验仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂的配制 | 第50-51页 |
| ·实验设计 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-56页 |
| ·提取细胞总RNA及合成cDNA第一条链 | 第52页 |
| ·V_H和V_L基因的扩增 | 第52-53页 |
| ·SOE拼接scFv基因 | 第53页 |
| ·scFv基因的克隆 | 第53页 |
| ·scFv基因的鉴定 | 第53-54页 |
| ·scFv噬菌体抗体库的建立 | 第54页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第54页 |
| ·特异性噬菌体抗体的鉴定 | 第54-55页 |
| ·scFv的分泌表达 | 第55页 |
| ·分泌表达产物的特异性鉴定 | 第55-56页 |
| ·细胞ELISA检测 | 第55页 |
| ·Dot Blotting活性分析 | 第55页 |
| ·红细胞凝集实验 | 第55-56页 |
| ·特异抗Rh(D)抗体scFv的序列分析 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·细胞总RNA的鉴定 | 第56页 |
| ·scFv基因扩增产物的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组噬菌体质粒的酶切鉴定及PCR验证 | 第57页 |
| ·噬菌体抗体库的建立 | 第57-58页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第58页 |
| ·噬菌体抗体库的鉴定 | 第58页 |
| ·scFv的特异性鉴定 | 第58页 |
| ·序列分析 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
