| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-40页 |
| 第一节 睾丸的结构与精子发生过程 | 第11-16页 |
| 1 睾丸的结构和功能 | 第11-13页 |
| ·睾丸的形态与结构 | 第11页 |
| ·睾丸的功能 | 第11-12页 |
| ·曲细精管的组织结构 | 第12-13页 |
| 2 精子发生过程 | 第13-16页 |
| ·精原细胞的有丝分裂增殖期 | 第14页 |
| ·精母细胞减数分裂期 | 第14页 |
| ·精子细胞变态形成成熟精子期 | 第14-16页 |
| 第二节 精原干细胞的体外培养 | 第16-26页 |
| 1 精原干细胞的起源与功能 | 第16-18页 |
| ·精原干细胞的起源 | 第16页 |
| ·精原干细胞与精子发生 | 第16页 |
| ·精原干细胞的形态和功能 | 第16-18页 |
| 2 精原干细胞体外培养 | 第18-26页 |
| ·精原干细胞体外培养简史 | 第18-21页 |
| ·体外培养的精原干细胞的特征及分离纯化 | 第21-22页 |
| ·影响精原干细胞体外培养的因素 | 第22-24页 |
| ·精原干细胞的鉴定方法 | 第24页 |
| ·精原干细胞自我增殖的维持机制 | 第24-26页 |
| 第三节 GDNF与睾丸发育和功能 | 第26-32页 |
| 1 GDNF的发现 | 第26-27页 |
| 2 GDNF受体 | 第27-28页 |
| 3 GDNF对睾丸的调节功能 | 第28-29页 |
| 4 GDNF的作用机制 | 第29-32页 |
| ·依赖RET的GDNF通路 | 第30页 |
| ·不依赖RET的GDNF通路 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-40页 |
| 第二部分 研究内容 | 第40-67页 |
| 第一节 小鼠GDNF基因的克隆、重组质粒pcDNA3.1-GDNF的构建和NIH-3T3细胞的转染与筛选 | 第40-52页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 材料和方 | 第40-47页 |
| ·组织来源和主要试剂 | 第40-41页 |
| ·小鼠睾丸组织总 RNA 的提取 | 第41页 |
| ·特异性引物设计及合成 | 第41页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第41-43页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·目的片段的克隆、鉴定和序列测定 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44页 |
| ·阳性转基因细胞的检测 | 第44-47页 |
| 3. 结果 | 第47-51页 |
| ·小鼠睾丸组织总 RNA 的完整性 | 第47-48页 |
| ·小鼠GDNF基因cDNA的扩增 | 第48-51页 |
| 4 结论与讨论 | 第51-52页 |
| 第二节 用转GDNF基因的NIH-3T3细胞饲养层培养小鼠精原干细胞 | 第52-65页 |
| 1 引言 | 第52页 |
| 2 实验材料和研究方法 | 第52-59页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·培养基和培养条件 | 第53-54页 |
| ·睾丸细胞的分离和收集 | 第54-55页 |
| ·生精细胞的富集与培养 | 第55页 |
| ·免疫细胞化学分析 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-59页 |
| 3 结果 | 第59-63页 |
| ·差异贴壁分选富集了小鼠精原干细胞 | 第59-60页 |
| ·转GDNF基因的NIH-3T3细胞饲养层促进精原干细胞存活 | 第60-61页 |
| ·培养的小鼠精原干细胞在体外形成细胞克隆 | 第61-62页 |
| ·KSR无血清培养不支持精原干细胞在体外的长期增殖 | 第62-63页 |
| 4 结论与讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 发表和投送的文章 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
