| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-44页 |
| 1 藻类基因工程的研究进展 | 第13-29页 |
| ·表达载体的构建 | 第14-21页 |
| ·基因转化方法 | 第21-23页 |
| ·藻类组织培养技术 | 第23-27页 |
| ·转基因藻体的鉴定 | 第27-29页 |
| 2. 有关紫菜转基因的研究 | 第29-37页 |
| ·紫菜的生物学特性 | 第29-32页 |
| ·紫菜转基因研究进展 | 第32-37页 |
| 3. 农杆菌介导的基因转化的研究进展 | 第37-44页 |
| ·农杆菌的生物学特性及宿主范围 | 第37-38页 |
| ·农杆菌介导遗传转化的原理 | 第38-40页 |
| ·农杆菌介导转化的方法 | 第40-41页 |
| ·影响转化的因素 | 第41-44页 |
| 第二章 条斑紫菜的β－微管蛋白基因全长及侧翼序列的克隆 | 第44-63页 |
| 1. 材料 | 第45-46页 |
| 2. 方法 | 第46-53页 |
| ·紫菜基因组 DNA 的提取 | 第46页 |
| ·微管蛋白β-tubulin 部分序列的 PCR 扩增 | 第46-48页 |
| ·pBluescript II KS 质粒 DNA 的小量提取 | 第48-49页 |
| ·T-vector 的制备 | 第49-50页 |
| ·PCR 产物与pKS T-vector 的连接 | 第50页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第50-51页 |
| ·阳性克隆的筛选及序列测定 | 第51-52页 |
| ·反向 PCR 扩增微管蛋白基因全序列及其侧翼序列 | 第52页 |
| ·序列分析与进化树的构建 | 第52-53页 |
| 3. 结果 | 第53-60页 |
| ·微管蛋白基因的简并 PCR 和反向 PCR 的电泳分析 | 第53-54页 |
| ·微管蛋白基因的全序列及其侧翼序列 | 第54-57页 |
| ·微管蛋白的系统进化树的建立 | 第57-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 β－微管蛋白基因侧翼序列控制下条斑紫菜原生质体瞬间表达的研究 | 第63-88页 |
| 1 材料 | 第64-67页 |
| 2 方法 | 第67-72页 |
| ·紫菜原生质体的制备 | 第67页 |
| ·条斑紫菜5’和3’非翻译区的 PCR 扩增 | 第67-68页 |
| ·表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·用于瞬间表达研究的质粒载体的纯化 | 第69-71页 |
| ·电击转化紫菜原生质体 | 第71页 |
| ·GUS 活性的定量检测 | 第71-72页 |
| 3. 结果 | 第72-85页 |
| ·条斑紫菜微管蛋白基因5’和3’调控序列的扩增和克隆 | 第72-75页 |
| ·瞬间表达载体pATubGUS 的构建 | 第75-76页 |
| ·瞬间表达载体pBITu65L、pBITu65M 和pBITu655 的鉴定 | 第76-77页 |
| ·瞬间表达载体pUCTubGUS 和pUCTubGU53L 的鉴定 | 第77-80页 |
| ·瞬间表达载体的pATubGUS 的瞬间表达的研究 | 第80-82页 |
| ·载体pBITu65L、pBITu65M 和pBITu655、p81221 的瞬间表达水平的比较 | 第82-84页 |
| ·载体pBITu65L、pUCTubGU535 和pUCTubGUSL 的瞬间表达水平的比较 | 第84页 |
| ·载体 pBITub5L、pUCTubGUS3S 和 pUCTubGUSL 的瞬时表达水平的 比较(不同长度 3’调控序列的转录终止活性) | 第84-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-88页 |
| 第四章 农杆菌介导的条斑紫菜原生质体瞬间表达的研究 | 第88-105页 |
| 1. 材料 | 第88-91页 |
| 2. 方法 | 第91-94页 |
| ·表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·农杆菌 EHA105 的转化 | 第92-93页 |
| ·农杆菌介导的条斑紫菜原生质体瞬间表达 | 第93-94页 |
| ·CAT 活性的检测 | 第94页 |
| ·GUS活性的检测 | 第94页 |
| 3. 结果 | 第94-101页 |
| ·大肠杆菌载体pATubCAT-H 的构建及其酶切鉴定 | 第94-97页 |
| ·双元表达载体pCAMBIA 1302TubCAT 的构建及其酶切鉴定 | 第97-98页 |
| ·双元表达载体pCAMBIA 3301Tub5L 的构建及其酶切鉴定 | 第98-99页 |
| ·农杆菌介导的条斑紫菜原生质体瞬间表达的研究 | 第99-101页 |
| 4. 讨论 | 第101-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
