| 摘要: | 第1-4页 |
| ABSTRACT: | 第4-11页 |
| 第一部分 超嗜热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶的高表达和纯化 | 第11-24页 |
| 摘要 | 第11页 |
| 关键词 | 第11页 |
| 1. 引言 | 第11-14页 |
| 2. 材料和方法 | 第14-18页 |
| ·试剂,菌株和质粒 | 第14页 |
| ·质粒pSBETH6-lrsa 和pET-15B-lrsb 的构建 | 第14-16页 |
| ·His6-αβ-LeuRS 基因的表达 | 第16页 |
| ·His6-αβ-LeuRS 的纯化 | 第16-17页 |
| ·酶活性和动力学常数的测定 | 第17-18页 |
| 3. 结果和讨论 | 第18-21页 |
| ·得到重组质粒pSBETH6-lrsa 和pET-15b-lrsb | 第18页 |
| ·His6-αβ-LeuRS 的基因表达和蛋白质纯化 | 第18-20页 |
| ·His6-αβ-LeuRS 的氨基酰化活力和动力学常数 | 第20-21页 |
| 4. 参考文献 | 第21-24页 |
| 第二部分 氨基酰-tRNA 合成酶复合物结构和功能的研究 | 第24-94页 |
| 第一章 复合物中亮氨酰-tRNA 合成酶的 C-末端延伸肽段与精氨酰-tRNA 合成酶相互作用 | 第24-66页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 关键词 | 第24-25页 |
| 1. 引言 | 第25-28页 |
| 2. 材料和方法 | 第28-42页 |
| ·试剂,质粒,菌株和细胞株 | 第28-30页 |
| ·ΔChcLeuRS 的基因克隆,表达和蛋白质纯化 | 第30-31页 |
| ·从小牛肝tRNA 中分离tRNA~(Leu) | 第31-32页 |
| ·人胞质tRNALeu(AAG)和tRNAArg(ACG)的体外转录 | 第32-36页 |
| ·酶活力和动力学常数的测定 | 第36-37页 |
| ·hcLeuRS 的自身免疫原活性的检测 | 第37-38页 |
| ·hcLeuRS 和?ChcLeuRS 的热稳定性测定 | 第38页 |
| ·共聚焦显微镜(confocal fluorescence microscopy)观测hcLeuRS, ΔChcLeuRS, hcArgRS 和ΔNhcArgRS 在293T 细胞中的定位 | 第38-39页 |
| ·免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)实验所需的质粒构建和抗体制备 | 第39-40页 |
| ·细胞培养,DNA 转染和免疫共沉淀(IP)实验 | 第40页 |
| ·Western 印迹实验(Western blot,WB) | 第40-41页 |
| ·GST pull-down 实验 | 第41-42页 |
| 3. 实验结果 | 第42-53页 |
| ·ΔChcLeuRS 的基因表达和蛋白质的纯化 | 第42-43页 |
| ·小牛肝tRNA 的分级和人胞质tRNA~(Leu)(AAG)和tRNA~(Arg)(ACG)的体外转录 | 第43-45页 |
| ·ΔChcLeuRS 的活力和动力学常数 | 第45页 |
| ·血清中和实验 | 第45页 |
| ·hcLeuRS 和ΔChcLeuRS 具有相似的热稳定性 | 第45-46页 |
| ·293T 细胞中,hcLeuRS, ΔChcLeuRS, hcArgRS 和ΔNhcArgRS的亚细胞定位 | 第46-48页 |
| ·hcArgRS 和ΔNhcArgRS 的动力学常数 | 第48-49页 |
| ·hcLeuRS 的C-末端延伸肽段和hcArgRS 的N-末端延伸肽段相互作用 | 第49-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-58页 |
| 5. 参考文献 | 第58-66页 |
| 第二章 氨基酰-tRNA 合成酶复合物中辅助因子对氨基酰-tRNA 合成酶具有活力促进作用 | 第66-94页 |
| 摘要 | 第66页 |
| 关键词 | 第66页 |
| 1. 引言 | 第66-69页 |
| 2. 材料和方法 | 第69-74页 |
| ·试剂,质粒和菌株 | 第69-70页 |
| ·基因克隆 | 第70页 |
| ·基因表达 | 第70-71页 |
| ·GST 融合蛋白质和Hi56 融合蛋白质纯化 | 第71-72页 |
| ·三种因子对aaRS 的氨基酰化活力影响的测定 | 第72-74页 |
| ·三种因子对aaRS 的氨基酰化时间曲线影响的测定 | 第74页 |
| 3. 实验结果 | 第74-82页 |
| ·GST 融合蛋白质的纯化和剪切 | 第74页 |
| ·His6 融合蛋白质纯化 | 第74-75页 |
| ·p43,p38 和p18 对aaRS 氨基酰化活力和时间曲线的影响 | 第75-79页 |
| ·p43,p38 和p18 对不同种属的LeuRS 的氨基酰化活力和时间曲线的影响 | 第79-82页 |
| 4. 讨论 | 第82-86页 |
| 5. 参考文献 | 第86-94页 |
| 结论 | 第94-97页 |
| 附录:本论文缩写汇编 | 第97-101页 |
| 在学期间发表的论文 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
