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冬虫夏草无性型培养与鉴定及其抗肿瘤机制的研究

中文摘要第1-4页
ABSTRAC第4-6页
目录第6-10页
英文缩写表第10-11页
第一章 文献综述第11-26页
 1 冬虫夏草的概述第11-13页
   ·虫草属真菌的研究历史第11页
   ·虫草属真菌的种类资源第11-12页
   ·冬虫夏草的生物学特性第12-13页
 2 冬虫夏草有性型人工培育技术第13-14页
   ·冬虫夏草人工培育现状第13-14页
   ·半人工栽培第14页
 3 冬虫夏草无性型的研究概况第14-19页
   ·无性型的培养第14-15页
   ·已发表的冬虫夏草的无性型的名称第15-17页
   ·无性型的鉴定第17-19页
 4.冬虫夏草药抗肿瘤作用第19-22页
   ·在体外第19-20页
   ·在体内第20页
   ·抗肿瘤机制第20-22页
 5 冬虫夏草有效成分第22-25页
   ·虫草多糖第22-23页
   ·蛋白和氨基酸第23页
   ·糖醇、甾醇类第23页
   ·脂肪和脂肪酸第23-24页
   ·抗菌活性物质第24页
   ·虫草素和生物碱第24页
   ·微量元素第24页
   ·新型免疫抑制剂第24-25页
   ·其他成分第25页
 小结第25-26页
第二章 冬虫夏草无性型的培养第26-41页
 引言第26页
 1 材料与方法第26-28页
   ·分离培养第26-27页
   ·菌丝结构的观察第27-28页
   ·子囊孢子和菌丝体感染幼虫实验第28页
 2 结果第28-37页
   ·虫草菌生长观察第28页
   ·菌丝显微结构第28-31页
   ·温度对菌丝生长的影响第31页
   ·通气对菌丝生长和结构的影响第31页
   ·pH值对菌丝生长的影响第31-32页
   ·荧光显微镜下观察第32页
   ·摇菌时间对菌丝重的影响第32-33页
   ·不同氮源对菌丝生长的影响第33页
   ·不同碳源对菌丝生长的影响第33-34页
   ·子囊孢子和菌丝感染幼虫实验结果第34-35页
   ·免疫组化染色第35-37页
 3 讨论第37-40页
   ·冬虫夏草无性型的分离及生长特性第37-38页
   ·选择碳氮源、控制摇菌时间提高菌丝产量第38-39页
   ·人工诱导僵虫第39页
   ·菌丝免疫组化染色特性第39-40页
 小结第40-41页
第三章 冬虫夏草无性型的鉴定第41-57页
 引言第41-42页
 1 材料和方法第42-47页
   ·主要仪器第42页
   ·主要试剂第42-43页
   ·溶液的配制第43页
   ·研究材料和来源第43页
   ·真菌DNA的提取(按EZNA FungalDNAKit方法)第43-45页
   ·真菌基因组DNA琼脂糖凝胶电泳分析第45页
     ·引物设计与合成第45-46页
   ·PCR反应第46页
   ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳分析第46页
   ·PCR产物的回收纯化第46-47页
   ·序列测定和数据的处理第47页
 2 结果与分析第47-50页
   ·总DNA的提取第47页
   ·特定区域的PCR扩增结果第47-48页
   ·序列测定结果第48页
   ·序列排列和数据处理分析第48-50页
 3 讨论第50-51页
   ·冬虫夏草无性型的分子鉴别第50-51页
   ·不同产地冬虫夏草遗传多样性分析第51页
 小结第51-57页
第四章 冬虫夏草甘露醇的测定第57-70页
 引言第57页
 1 材料与方法第57-60页
   ·冬虫夏草甘露醇的提取第57-58页
   ·比色法测定甘露醇第58-59页
   ·氧化还原滴定法(容量法)第59-60页
   ·样品甘露醇比色法测定第60页
 2 结果第60-68页
   ·比色法第60-61页
   ·容量法第61-63页
   ·比色法和容量法测定甘露醇含量的比较第63页
   ·振荡培养对菌液和菌丝体甘露醇含量的影响(比色法)第63-67页
   ·不同氮源对甘露醇含量的影响(比色法)第67-68页
 3 讨论第68-69页
   ·不同虫草和冬虫夏草不部分甘露醇含量有差异第68页
   ·容量法与比色法的比较第68-69页
   ·振荡培养对甘露醇含量的影响第69页
   ·氮源对甘露醇含量的影响第69页
 小结第69-70页
第五章 冬虫夏草多糖的提取第70-80页
 引言第70页
 1 材料和方法第70-72页
   ·溶液的配制第70-71页
   ·多糖的提取第71页
   ·多糖的测定(硫酸-苯酚法)第71-72页
 2 结果第72-78页
   ·供试液吸收曲线第72-73页
   ·葡聚糖线性范围第73页
   ·葡萄糖线性范围第73-74页
   ·冬虫夏草和菌丝体多糖的含量第74-75页
   ·不同处理多糖的影响第75页
   ·振荡培养对菌丝多糖的影响第75-77页
   ·氮源对菌丝多糖影响第77-78页
 3 讨论第78-79页
   ·冬虫夏草和菌丝多糖含量第78页
   ·不同处理对多糖含量的影响第78-79页
   ·摇菌抑制菌丝多糖产生第79页
   ·氮源对菌丝多糖影响第79页
 小结第79-80页
第六章 冬虫夏草菌丝体对SP2/0细胞凋亡的作用第80-101页
 引言第80-81页
 1.材料和方法第81-87页
   ·材料第81-83页
   ·方法第83-87页
 2.结果第87-98页
   ·冬虫夏草对瘤细胞的形态影响第87-89页
   ·冬虫夏草对瘤细胞增殖影响第89-90页
   ·总DNA电泳第90-91页
   ·冬虫夏草对肿瘤细胞周期的影响第91-92页
   ·冬虫夏草对肿瘤细胞凋亡的影响第92-95页
   ·总RNA提取第95-96页
   ·cDNA制备RT-PCP扩增第96页
   ·实时荧光定量PCR反应结果第96-98页
 3 讨论第98-100页
   ·冬虫夏草菌丝水提液和多糖对肿瘤细胞抑制作用第98-99页
   ·冬虫夏草菌丝水提液和多糖诱导肿瘤细胞凋亡第99页
   ·冬虫夏草菌丝水提液和多糖对肿瘤细胞p53基因表达作用第99-100页
 小结第100-101页
结论第101-102页
创新第102-103页
参考文献第103-112页
附录第112-119页
致谢第119-120页
个人简介第120页

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