目录 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
缩写词及专用名词 | 第14-16页 |
第一篇 文献综述 | 第16-50页 |
第一章 植物耐盐机制的研究进展 | 第16-25页 |
1 盐渍环境对植物的伤害 | 第16-17页 |
·膜损伤 | 第16-17页 |
·离子毒害 | 第17页 |
·活性氧伤害 | 第17页 |
·光合下降、耗能增加 | 第17页 |
·营养离子吸收不平衡 | 第17页 |
2 植物耐盐机理的研究 | 第17-22页 |
·渗透调节 | 第18-20页 |
·多元醇 | 第18页 |
·脯氨酸 | 第18-19页 |
·甜菜碱 | 第19-20页 |
·消除Na~+毒害的策略——离子平衡 | 第20-21页 |
·Na~+的吸收 | 第20页 |
·Na~+的外排 | 第20页 |
·盐的区隔化 | 第20-21页 |
·调节水通道的活性 | 第21-22页 |
·改变光合作用途径 | 第22页 |
·清除细胞中的活性氧 | 第22页 |
3 盐胁迫信号传递途径 | 第22-25页 |
第二章 植物蛋白激酶的研究进展 | 第25-31页 |
1 蛋白激酶的分类 | 第25页 |
2 与植物抗逆相关的的蛋白激酶 | 第25-31页 |
·受体蛋白激酶 | 第26页 |
·促分裂原活化蛋白激酶 | 第26-27页 |
·核糖体蛋白激酶 | 第27-28页 |
·转录调控蛋白激酶 | 第28页 |
·钙依赖蛋白激酶 | 第28-31页 |
第三章 植物耐盐基因工程研究进展 | 第31-42页 |
1 植物基因的克隆方法 | 第31-39页 |
·对已知序列进行分子克隆 | 第31页 |
·从蛋白质到基因序列 | 第31-32页 |
·根据植株或细胞的表型变异进行基因分离 | 第32-33页 |
·转座子示踪技术 | 第32页 |
·基因挽救技术 | 第32页 |
·基因组相减技术 | 第32页 |
·cDNA差式显示和差式分析法 | 第32-33页 |
·cDNA-AFLP | 第33页 |
·与已知基因紧密连锁基因的分离 | 第33-34页 |
·利用cDNA末端快速扩增技术获得基固cDNA全长 | 第34-39页 |
·3′RACE | 第34页 |
·5′RACE | 第34-36页 |
·RACE实验中引物设计的注意事项 | 第36-39页 |
2 耐盐相关基因及其研究进展 | 第39-42页 |
第四章 植物遗传转化研究进展 | 第42-47页 |
1 植物遗传转化的方法 | 第42-45页 |
·农杆菌介导的遗传转化法 | 第42-44页 |
·农杆菌介导的遗传转化法的发展与优化 | 第42-43页 |
·农杆菌介导的遗传转化机理 | 第43-44页 |
·农杆菌介导的遗传转化法的应用 | 第44页 |
·基因枪法 | 第44-45页 |
·电击法和PEG法 | 第45页 |
·花粉管通道法 | 第45页 |
2 表达载体的构建 | 第45-47页 |
·启动子 | 第45-46页 |
·选择标记基因 | 第46-47页 |
第五章 研究目的及意义 | 第47-50页 |
1 本室小麦耐盐相关基因的研究进展 | 第47-49页 |
2 本研究的目的及意义 | 第49-50页 |
第二篇 研究报告 | 第50-127页 |
第一章 小麦耐盐突变体的耐盐性检测 | 第50-58页 |
1 材料与方法 | 第50-52页 |
·实验材料 | 第50页 |
·实验方法 | 第50-52页 |
·发芽测定种子活力实验 | 第50-51页 |
·胚根细胞质膜透性的测定 | 第51页 |
·SOD酶活性的测定 | 第51-52页 |
2 结果与分析 | 第52-58页 |
·发芽测定种子活力实验结果与分析 | 第52-54页 |
·胚根细胞质膜透性的测定 | 第54-57页 |
·SOD酶活性的测定结果 | 第57-58页 |
第二章 小麦耐盐相关基因的反向Northern检测 | 第58-66页 |
1 材料与方法 | 第58-62页 |
·实验材料 | 第58页 |
·实验方法 | 第58-62页 |
·质粒的提取 | 第58-59页 |
·反向Northern杂交 | 第59-62页 |
2 结果与分析 | 第62-64页 |
·质粒提取和扩增检测结果 | 第62-63页 |
·RNA提取电泳检测结果 | 第63页 |
·反向Northern结果 | 第63-64页 |
3 讨论 | 第64-66页 |
第三章 小麦耐盐相关基因的3′RACE | 第66-80页 |
1 材料与方法 | 第66-70页 |
·实验材料 | 第66页 |
·3′RACE引物的设计 | 第66-67页 |
·实验方法 | 第67-70页 |
·总RNA的提取 | 第67页 |
·目的基因的3′RACE扩增 | 第67-68页 |
·PCR产物的回收 | 第68-69页 |
·PCR产物与T-载体(PGEM-T)的连接 | 第69页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第69页 |
·连接产物的转化 | 第69-70页 |
·序列的比较和分析 | 第70页 |
2 结果与分析 | 第70-80页 |
·RNA提取和鉴定 | 第70页 |
·23号cDNA片段的3′RACE | 第70-76页 |
·88号cDNA片段的3′RACE | 第76-80页 |
第四章 小麦耐盐相关基因的5′RACE | 第80-99页 |
1 材料与方法 | 第80-85页 |
·实验材料 | 第80-81页 |
·实验方法 | 第81-85页 |
·总RNA的提取 | 第81页 |
·5′RACE | 第81-85页 |
2 结果与分析 | 第85-99页 |
·RNA提取和鉴定 | 第85页 |
·88号cDNA片段的5′RACE | 第85-94页 |
·81号cDNA片段的5′RACE | 第94-99页 |
第五章 小麦TaSTK基因的Northern杂交 | 第99-104页 |
1 材料与方法 | 第99-102页 |
·实验材料 | 第99页 |
·实验方法 | 第99-102页 |
·RNA提取和检测 | 第99页 |
·Northern杂交 | 第99-102页 |
2 结果与分析 | 第102-104页 |
·RNA提取和鉴定 | 第102页 |
·PCR标记探针的预扩增实验 | 第102页 |
·TaSTK基因的Northern杂交 | 第102-104页 |
第六章 TaSTK基因功能的初步研究 | 第104-116页 |
1 材料与方法 | 第104-109页 |
·实验材料 | 第104页 |
·实验方法 | 第104-109页 |
·质粒的酶切及目的片段的回收 | 第104-105页 |
·连接反应 | 第105页 |
·连接产物转入大肠杆菌 | 第105页 |
·双元表达载体p1300:35S:TaSTK:NOS转化农杆菌 | 第105-106页 |
·根癌农杆菌GV3101转化拟南芥 | 第106-107页 |
·阳性植株的筛选和TaSTK基因功能的初步研究 | 第107-109页 |
2 结果与分析 | 第109-116页 |
·双元表达载体p1300:35S:TaSTK:NOS的构建和大肠杆菌、农杆菌转化 | 第109-111页 |
·农杆菌转化拟南芥 | 第111-114页 |
·阳性植株的筛选及转化率统计 | 第111页 |
·小麦丝氮酸/苏氨酸激酶对拟南芥主根生长的影响 | 第111-113页 |
·小麦丝氨酸/苏氨酸激酶对拟南芥侧根生长数量的影响 | 第113-114页 |
·转基因植株的PCR鉴定 | 第114-115页 |
·转基因植株的RT-PCR鉴定 | 第115-116页 |
第七章 讨论 | 第116-125页 |
1 TaSTK属于与小麦抗逆相关的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第116-120页 |
2 细胞色素P450家族与植物抗性的关系 | 第120-121页 |
3 对目的片段进行反向Northern杂交和Northern杂交结果的相互验证 | 第121-122页 |
4 RACE技术应该注意的一些事项 | 第122-123页 |
5 电子拼接技术在基因序列研究中的应用 | 第123-125页 |
第八章 结论 | 第125-127页 |
附录 | 第127-129页 |
参考文献 | 第129-141页 |
攻读博士期间发表的学术论文 | 第141-142页 |
致谢 | 第142页 |