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小麦耐盐相关基因cDNA的克隆与功能研究

目录第1-9页
中文摘要第9-11页
英文摘要第11-14页
缩写词及专用名词第14-16页
第一篇 文献综述第16-50页
 第一章 植物耐盐机制的研究进展第16-25页
  1 盐渍环境对植物的伤害第16-17页
   ·膜损伤第16-17页
     ·离子毒害第17页
     ·活性氧伤害第17页
   ·光合下降、耗能增加第17页
   ·营养离子吸收不平衡第17页
  2 植物耐盐机理的研究第17-22页
   ·渗透调节第18-20页
     ·多元醇第18页
     ·脯氨酸第18-19页
     ·甜菜碱第19-20页
   ·消除Na~+毒害的策略——离子平衡第20-21页
     ·Na~+的吸收第20页
     ·Na~+的外排第20页
     ·盐的区隔化第20-21页
   ·调节水通道的活性第21-22页
   ·改变光合作用途径第22页
   ·清除细胞中的活性氧第22页
  3 盐胁迫信号传递途径第22-25页
 第二章 植物蛋白激酶的研究进展第25-31页
  1 蛋白激酶的分类第25页
  2 与植物抗逆相关的的蛋白激酶第25-31页
   ·受体蛋白激酶第26页
   ·促分裂原活化蛋白激酶第26-27页
   ·核糖体蛋白激酶第27-28页
   ·转录调控蛋白激酶第28页
   ·钙依赖蛋白激酶第28-31页
 第三章 植物耐盐基因工程研究进展第31-42页
  1 植物基因的克隆方法第31-39页
   ·对已知序列进行分子克隆第31页
   ·从蛋白质到基因序列第31-32页
   ·根据植株或细胞的表型变异进行基因分离第32-33页
     ·转座子示踪技术第32页
     ·基因挽救技术第32页
     ·基因组相减技术第32页
     ·cDNA差式显示和差式分析法第32-33页
     ·cDNA-AFLP第33页
   ·与已知基因紧密连锁基因的分离第33-34页
   ·利用cDNA末端快速扩增技术获得基固cDNA全长第34-39页
     ·3′RACE第34页
     ·5′RACE第34-36页
     ·RACE实验中引物设计的注意事项第36-39页
  2 耐盐相关基因及其研究进展第39-42页
 第四章 植物遗传转化研究进展第42-47页
  1 植物遗传转化的方法第42-45页
   ·农杆菌介导的遗传转化法第42-44页
     ·农杆菌介导的遗传转化法的发展与优化第42-43页
     ·农杆菌介导的遗传转化机理第43-44页
     ·农杆菌介导的遗传转化法的应用第44页
   ·基因枪法第44-45页
   ·电击法和PEG法第45页
   ·花粉管通道法第45页
  2 表达载体的构建第45-47页
   ·启动子第45-46页
   ·选择标记基因第46-47页
 第五章 研究目的及意义第47-50页
  1 本室小麦耐盐相关基因的研究进展第47-49页
  2 本研究的目的及意义第49-50页
第二篇 研究报告第50-127页
 第一章 小麦耐盐突变体的耐盐性检测第50-58页
  1 材料与方法第50-52页
   ·实验材料第50页
   ·实验方法第50-52页
     ·发芽测定种子活力实验第50-51页
     ·胚根细胞质膜透性的测定第51页
     ·SOD酶活性的测定第51-52页
  2 结果与分析第52-58页
     ·发芽测定种子活力实验结果与分析第52-54页
     ·胚根细胞质膜透性的测定第54-57页
     ·SOD酶活性的测定结果第57-58页
 第二章 小麦耐盐相关基因的反向Northern检测第58-66页
  1 材料与方法第58-62页
   ·实验材料第58页
   ·实验方法第58-62页
     ·质粒的提取第58-59页
     ·反向Northern杂交第59-62页
  2 结果与分析第62-64页
   ·质粒提取和扩增检测结果第62-63页
   ·RNA提取电泳检测结果第63页
   ·反向Northern结果第63-64页
  3 讨论第64-66页
 第三章 小麦耐盐相关基因的3′RACE第66-80页
  1 材料与方法第66-70页
   ·实验材料第66页
   ·3′RACE引物的设计第66-67页
   ·实验方法第67-70页
     ·总RNA的提取第67页
     ·目的基因的3′RACE扩增第67-68页
     ·PCR产物的回收第68-69页
     ·PCR产物与T-载体(PGEM-T)的连接第69页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第69页
     ·连接产物的转化第69-70页
     ·序列的比较和分析第70页
  2 结果与分析第70-80页
   ·RNA提取和鉴定第70页
   ·23号cDNA片段的3′RACE第70-76页
   ·88号cDNA片段的3′RACE第76-80页
 第四章 小麦耐盐相关基因的5′RACE第80-99页
  1 材料与方法第80-85页
   ·实验材料第80-81页
   ·实验方法第81-85页
     ·总RNA的提取第81页
     ·5′RACE第81-85页
  2 结果与分析第85-99页
   ·RNA提取和鉴定第85页
   ·88号cDNA片段的5′RACE第85-94页
   ·81号cDNA片段的5′RACE第94-99页
 第五章 小麦TaSTK基因的Northern杂交第99-104页
  1 材料与方法第99-102页
   ·实验材料第99页
   ·实验方法第99-102页
     ·RNA提取和检测第99页
     ·Northern杂交第99-102页
  2 结果与分析第102-104页
   ·RNA提取和鉴定第102页
   ·PCR标记探针的预扩增实验第102页
   ·TaSTK基因的Northern杂交第102-104页
 第六章 TaSTK基因功能的初步研究第104-116页
  1 材料与方法第104-109页
   ·实验材料第104页
   ·实验方法第104-109页
     ·质粒的酶切及目的片段的回收第104-105页
     ·连接反应第105页
     ·连接产物转入大肠杆菌第105页
     ·双元表达载体p1300:35S:TaSTK:NOS转化农杆菌第105-106页
     ·根癌农杆菌GV3101转化拟南芥第106-107页
     ·阳性植株的筛选和TaSTK基因功能的初步研究第107-109页
  2 结果与分析第109-116页
   ·双元表达载体p1300:35S:TaSTK:NOS的构建和大肠杆菌、农杆菌转化第109-111页
   ·农杆菌转化拟南芥第111-114页
     ·阳性植株的筛选及转化率统计第111页
     ·小麦丝氮酸/苏氨酸激酶对拟南芥主根生长的影响第111-113页
     ·小麦丝氨酸/苏氨酸激酶对拟南芥侧根生长数量的影响第113-114页
   ·转基因植株的PCR鉴定第114-115页
   ·转基因植株的RT-PCR鉴定第115-116页
 第七章 讨论第116-125页
  1 TaSTK属于与小麦抗逆相关的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶第116-120页
  2 细胞色素P450家族与植物抗性的关系第120-121页
  3 对目的片段进行反向Northern杂交和Northern杂交结果的相互验证第121-122页
  4 RACE技术应该注意的一些事项第122-123页
  5 电子拼接技术在基因序列研究中的应用第123-125页
 第八章 结论第125-127页
附录第127-129页
参考文献第129-141页
攻读博士期间发表的学术论文第141-142页
致谢第142页

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