| 文献综述 | 第1-34页 |
| 第一章 猪圆环病毒的研究进展 | 第14-27页 |
| ·猪圆环病毒的研究进展 | 第14-25页 |
| ·猪圆环病毒的发现和命名 | 第14页 |
| ·猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第14-15页 |
| ·猪圆环病毒的全球流行状况和分布 | 第15-16页 |
| ·猪圆环病毒的形态学特性 | 第16-17页 |
| ·猪圆环病毒的理化特性 | 第17页 |
| ·猪圆环病毒的基因组 | 第17页 |
| ·猪圆环病毒的复制与转录 | 第17-18页 |
| ·猪圆环病毒编码蛋白的研究 | 第18-20页 |
| ·猪圆环病毒Ⅱ型的致病机理 | 第20-21页 |
| ·组织病理学研究 | 第21-22页 |
| ·猪圆环病毒Ⅱ型的诊断 | 第22-25页 |
| ·病毒分离 | 第22页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第22页 |
| ·聚合酶链反应 | 第22-24页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第24页 |
| ·原位核酸杂交试验 | 第24-25页 |
| ·猪圆环病毒Ⅱ型感染的防制 | 第25页 |
| ·论文设计思路及技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 大肠杆菌与腺病毒表达系统概况 | 第27-34页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白研究进展 | 第27-29页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的优缺点 | 第27页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的特性及存在形式 | 第27-28页 |
| ·影响大肠杆菌表达系统表达外源蛋白的因素 | 第28-29页 |
| ·腺病毒表达系统 | 第29-34页 |
| ·腺病毒的基本结构 | 第29页 |
| ·腺病毒的感染机制 | 第29页 |
| ·腺病毒作为载体的发展 | 第29-31页 |
| ·腺病毒载体系统AdEasy是新型高效的目的基因转移系统 | 第31页 |
| ·应用腺病毒表达系统表达外源基因的优点 | 第31-32页 |
| ·腺病毒基因工程疫苗的特性 | 第32页 |
| ·在AdEasy腺病毒载体系统操作过程需注意一些问题 | 第32-33页 |
| ·腺病毒载体的发展前景 | 第33-34页 |
| 实验研究 | 第34-64页 |
| 第三章 2 型圆环病毒ORF2 基因在大肠杆菌中的表达 | 第34-48页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·菌种及质粒 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要药品及试剂 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-43页 |
| ·目的片断的扩增、纯化与回收 | 第35-37页 |
| ·PCV2 的DNA 提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·PCR 扩增ORF2 基因 | 第36页 |
| ·PCR 产物回收 | 第36-37页 |
| ·目的基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第38-39页 |
| ·小量提取质粒 | 第38页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第38-39页 |
| ·ORF2 基因原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·PCR 扩增ORF2 基因 | 第39-40页 |
| ·含ORF2 基因的原核表达载体构建 | 第40页 |
| ·重组融合蛋白pBAD/gⅢ-ORF2-的诱导表达及检测 | 第40-43页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第40页 |
| ·表达蛋白的检测 | 第40-43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第40-42页 |
| ·Western blot 分析 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·PCR 扩增ORF2 基因电泳结果 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·PCR 扩增ORF2 基因 | 第44页 |
| ·重组质粒pBAD/gⅢ-ORF2-的酶切和PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·ORF2-表达产物的SDS-PAGE 检测和Western blot 分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 圆环病毒2 型GD 株ORF1 基因重组腺病毒的构建及其表达 | 第48-63页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·质粒、菌种及细胞株 | 第48页 |
| ·工具酶及试剂 | 第48页 |
| ·仪器与设备 | 第48页 |
| ·DNA 操作中其他相关主要试剂 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·pAdeasy-1、pAdTrack-CMV 的转化、扩增及目的质粒提取 | 第49页 |
| ·引物设计、合成与目的基因的获得 | 第49页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定 | 第49-52页 |
| ·用于模板的PCV2 基因组DNA 制备 | 第50页 |
| ·PCR 反应扩增ORF1 基因 | 第50页 |
| ·纯化回收DNA 片段 | 第50页 |
| ·纯化的PCR 产物及pAdTrack-CMV 酶切处理 | 第50-51页 |
| ·连接反应 | 第51页 |
| ·DH5a 感受态细胞的制备(CaCl_2) 法 | 第51页 |
| ·连接产物的转化 | 第51页 |
| ·重组质粒的提取 | 第51页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第52页 |
| ·pAdEasy-1 和pAdTrack-CMV-ORF1 同源重组 | 第52-54页 |
| ·pAdEasier 的制备 | 第52页 |
| ·BJ5183 感受态菌制备 | 第52页 |
| ·pAdEasy-1 转化入BJ5183 | 第52页 |
| ·从BJ5183 宿主菌中抽提质粒pAdEasy-1 | 第52页 |
| ·酶切鉴定pAdEasy-1 的完整性 | 第52页 |
| ·pAdEasier 感受态的制备 | 第52页 |
| ·穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF1 线性化及纯化 | 第52-53页 |
| ·pAdTrack-CMV-ORF1 线性化 | 第52-53页 |
| ·线性化的pAdTrack-CMV-ORF1 的纯化 | 第53页 |
| ·线性化pAdTrack-CMV-ORF1 转化感受态pAdEasier 进行同源重组 | 第53页 |
| ·同源重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF1 的电泳及PCR 鉴定 | 第53页 |
| ·酶切鉴定pAdCMV-ORF1 | 第53-54页 |
| ·DH5a 感受态细胞的的制备 | 第53页 |
| ·pAdCMV-ORF1 转化DH5a | 第53页 |
| ·从DH5a 宿主菌中抽提质粒pAdCMV-ORF1 | 第53页 |
| ·酶切鉴定pAdCMV-ORF1 | 第53-54页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF1 的制备 | 第54-56页 |
| ·293 细胞的复苏和培养 | 第54页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF1 的包装 | 第54页 |
| ·Lipofectamine~(TM)2000 介导pAdCMV-ORF1 和pAdEasy-1 转染293 细胞 | 第54页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF1 的PCR 鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组腺病毒DNA 的制备 | 第54-55页 |
| ·以AdCMV-ORF1 扩增ORF1 基因 | 第55页 |
| ·重组腺病毒载体表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第55页 |
| ·重组腺病毒载体表达产物的Western Blot 鉴定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·ORF1 基因的PCR 扩增 | 第56页 |
| ·ORF1 重组穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF1 的构建及鉴定 | 第56-58页 |
| ·ORF1 重组穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF1 的酶切鉴定 | 第56页 |
| ·ORF1 重组穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF1 的测序鉴定 | 第56-58页 |
| ·同源重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF1 的构建及鉴定 | 第58-60页 |
| ·ORF1 重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF1 的PCR 鉴定 | 第58页 |
| ·重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF1 的酶切鉴定 | 第58-60页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF1 及其表达产物的鉴定 | 第60-61页 |
| ·脂质体转染293 细胞的病变观察 | 第60页 |
| ·表达PCV2 ORF1 的AdCMV-ORF1 荧光检测 | 第60页 |
| ·重组腺病毒AdCMV-ORF1 的PCR 鉴定 | 第60-61页 |
| ·AdCMV-ORF1 表达ORF1 的SDS-PAGE、Western Blot 鉴定 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 实验小结 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 1 | 第71-73页 |
| 附录 2 | 第73-74页 |
| 附录 3 | 第74-75页 |
| 附录 4 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
