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稻瘟病菌MGTA1基因的克隆与功能分析

1.文献综述第1-43页
     ·稻瘟病与稻瘟病菌第14页
     ·稻瘟病菌的侵染循环第14-17页
       ·孢子萌发第14-15页
       ·附着胞的分化和成熟第15-16页
       ·侵入栓形成和侵入第16页
       ·侵入后的菌丝分化与扩展第16页
       ·产孢与再侵染第16-17页
     ·稻瘟病菌的重要功能基因第17-41页
       ·参与产孢过程的基因第17-18页
       ·附着胞分化相关基因第18-26页
       ·附着胞的成熟与膨压形成过程中的功能基因第26-29页
       ·侵入栓形成及侵入相关基因第29-30页
       ·侵入后菌丝分化及扩展相关的基因第30-31页
       ·其它致病性相关基因第31-34页
       ·基因表达的调控第34-41页
     ·稻瘟病菌基因组草图的绘制及数据库的开发利用第41页
     ·本研究的目的、内容和意义第41-43页
2.材料与方法第43-60页
     ·MGTA1基因的确定与序列比对第43页
     ·菌株、培养基及培养条件第43-46页
       ·稻瘟病菌菌株、培养基及培养条件第43-45页
       ·细菌菌株、培养基及培养条件第45-46页
     ·DNA相关操作第46-56页
       ·基因组DNA提取第46-47页
       ·常规PCR、长片段PCR(>5kb)与RT-PCR第47-49页
       ·PCR产物的克隆第49页
       ·序列测定第49页
       ·DNA克隆程序第49-53页
       ·Southern杂交第53-56页
     ·MGTA1基因的GFP表达分析第56页
       ·融合载体的构建第56页
       ·稻瘟病菌eGFP转化子的荧光观察第56页
     ·MGTA1基因敲除及突变子功能分析第56-60页
       ·基因置换载体MGTA1::HPH的构建第56页
       ·互补载体的构建第56页
       ·稻瘟病菌原生质体的制备与转化第56-58页
       ·侵入相关的形态学观察第58-60页
3.结果与分析第60-94页
     ·MGTA1基因的分离和克隆第60-62页
       ·MGTA1基因的确定第60-61页
       ·MGTA1基因组序列的克隆与序列测定第61页
       ·MGTA1基因cDNA片段的克隆与序列测定第61-62页
     ·MGTA1基因的序列与分析第62-67页
       ·MGTA1基因的序列第62-64页
       ·MGTA1基因的同源基因第64-67页
     ·MGTA1基因在不同稻瘟病菌菌株基因组中的拷贝数第67-68页
     ·MGTA1基因的时空表达及亚细胞定位第68-75页
       ·融合载体MGTA1(p)::eGFP::HPH的构建第68-70页
       ·MGTA1(p)::eGFP::HPH转化子的荧光表达第70-71页
       ·融合载体MGTA1::eGFP::HPH的构建第71-74页
       ·MGTA1::eGFP::HPH转化子的荧光表达第74页
       ·MGTA1基因的RT-PCR检测第74-75页
     ·MGTA1基因敲除载体的构建及目标置换过程第75-76页
       ·MGTA1基因敲除载体MGTA1::HPH的构建第75-76页
       ·MGTA1基因的目标置换过程第76页
     ·两次敲除转化及⊿MGTA1突变子的获得第76-81页
       ·第一次敲除转化与⊿MGTA1突变子的获得第76-80页
       ·再次敲除转化及突变子的获得第80-81页
       ·MGTA1基因敲除的频率第81页
     ·⊿MGTA1突变子的表型(phenotypes)分析第81-92页
       ·⊿MGTA1突变子的菌落形态与生长速度第81-83页
       ·⊿MGTA1突变子的产孢量第83-85页
       ·⊿MGTA1突变子的分生孢子萌发、附着胞形成第85-87页
       ·⊿MGTA1突变子对洋葱表皮的穿透作用第87页
       ·⊿MGTA1突变子对大麦和水稻的致病性第87-90页
       ·⊿MGTA1突变子有性世代的产生第90-91页
       ·⊿MGTA1突变子对纤维素的利用第91-92页
       ·A17与A37的表型第92页
     ·突变子互补载体的构建及转化第92-93页
     ·突变子的MGTA1基因3’下游序列第93-94页
4.讨论第94-101页
5.小结第101-103页
6.参考文献第103-117页

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