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猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的原核表达及PPA-NS1-ELISA方法的初步建立

中文摘要第1-4页
英文摘要第4-8页
前言第8-17页
一 材料与方法第17-30页
 1 实验材料和主要仪器第17-19页
   ·实验材料第17-18页
     ·质粒与菌株第17页
     ·主要试剂第17-18页
   ·主要仪器第18-19页
 2 实验方法第19-30页
   ·重组质粒的构建第19-21页
     ·PET-30a(+)载体、pPNS1质粒EcoRI、HindⅢ双酶切、回收第19-20页
     ·大肠杆菌JM109感受态细胞制备第20页
     ·重组质粒的连接、转化第20-21页
   ·重组质粒的鉴定第21-23页
     ·菌落PCR鉴定第21页
     ·分子杂交鉴定第21-22页
     ·酶切鉴定第22页
     ·测序鉴定第22-23页
   ·重组质粒在大肠杆菌中的表达与鉴定第23-26页
     ·重组质粒转化到BL21中第23页
     ·表达质粒的提取与鉴定第23页
     ·诱导表达第23-25页
     ·Western-blot杂交分析第25-26页
   ·表达产物的纯化第26-27页
     ·NS1蛋白的获取及纯化第26-27页
     ·NS1蛋白含量的测定第27页
   ·PPA-NS1-ELISA方法的初步建立第27-30页
     ·NS1抗原最佳稀释度和血清最佳稀释度的选择第27-28页
     ·判定标准的确定第28页
     ·待检血清中抗E.coli成份的除去第28页
     ·PPA-NS1-ELISA方法的操作程序第28-29页
     ·PPA-NS1-ELISA与间接血凝抑制(HI)方法的比较试验第29页
     ·NS1-ELISA特异性试验第29页
     ·NS1-ELISA重复性试验第29页
     ·临床样品的检测第29-30页
二 结果与分析第30-38页
 1 重组质粒的鉴定第30-32页
   ·菌落PCR鉴定第30页
   ·分子杂交鉴定第30页
   ·酶切鉴定第30-31页
   ·测序鉴定第31-32页
 2 重组质粒在大肠杆菌中的表达与鉴定第32-34页
   ·重组质粒转化到大肠杆菌BL21后的酶切鉴定第32页
   ·表达产物的SDS-PAGE电泳第32-34页
     ·最佳诱导条件的确定第32-33页
     ·目的蛋白表达细胞定位的分析第33页
     ·目的蛋白表达量的分析第33-34页
   ·Western-blot杂交分析第34页
 3 表达产物的纯化第34-35页
   ·NS1蛋白的纯化第34页
   ·NS1蛋白浓度测定第34-35页
 4 PPA-NS1-ELISA方法的初步建立第35-38页
   ·NS1抗原最佳稀释度和血清最佳稀释度的确定第35页
   ·判定标准的确定第35-36页
   ·PPA-NS1-ELISA与HI的比较试验第36页
   ·PPA-NS1-ELISA特异性试验第36页
   ·PPA-NS1-ELISA重复性试验第36-37页
   ·PPA-NS1-ELISA临床样品的检测第37-38页
三 讨论第38-43页
 1 关于重组质粒的构建第38页
   ·制备载体第38页
   ·外源片段准备第38页
   ·重组质粒的鉴定第38页
 2 关于PET载体系统第38-40页
 3 关于NS1蛋白诱导表达第40-41页
   ·诱导表达条件第40页
   ·目的蛋白细胞定位第40-41页
   ·蛋白质的纯化第41页
 4 关于PPA-NS1-ELISA方法第41-43页
四 结论第43-44页
参考文献第44-48页
致谢第48-49页
发表文章目录第49页

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