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棉花遗传转化及体细胞无性系变异研究

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-15页
第1章 文献综述第15-37页
   ·棉花生物技术研究进展第15-24页
     ·棉花再生体系的建立第15-17页
     ·棉花遗传转化的方法第17-19页
     ·转基因抗虫棉第19-21页
     ·转基因抗病棉花的研究第21-22页
     ·抗除草剂棉花第22-23页
     ·对棉花其它性状的遗传改良第23-24页
     ·小结第24页
   ·植物体细胞无性系变异研究进展第24-37页
     ·性状变异的表现第25-26页
     ·对植物体细胞无性系变异的利用第26-28页
     ·植物体细胞无性系变异的细胞学表现第28-29页
     ·蛋白质水平的变异第29页
     ·RFLP变异第29-30页
     ·RAPD变异第30-31页
     ·SSR变异第31页
     ·其它分子标记在研究植物体细胞无性系变异中的应用第31-32页
     ·植物体细胞无性系变异的来源第32页
     ·植物体细胞培养中的外遗传变异第32-33页
     ·植物体细胞无性系变异中的点突变第33页
     ·植物组织培养激活转座因子第33-34页
     ·植物组织培养引起DNA甲基化水平变化第34-35页
     ·植物体细胞无性系变异的控制第35页
     ·转基因研究中的变异问题第35-36页
     ·小结第36-37页
第2章 引言第37-40页
第3章 棉花遗传转化研究第40-71页
   ·材料第40-42页
     ·植物材料第40页
     ·菌株与质粒第40-41页
     ·主要化学试剂第41页
     ·主要仪器设备第41页
     ·常用溶液配方第41-42页
     ·基本培养基配方第42页
   ·实验方法第42-45页
     ·棉花体细胞培养的基本程序第42-43页
     ·体胚苗种子的获取第43页
     ·直接体胚发生研究第43页
     ·直接体胚发生材料体胚发生能力的研究第43页
     ·胚性愈伤组织基因枪转化第43页
     ·胚性愈伤组织的农杆菌转化第43-44页
     ·下胚轴农杆菌转化第44页
     ·抗病基因导入棉花第44页
     ·转CEMA基因棉株叶绿素含量测定和叶绿素a/b值的计算第44页
     ·转CEMA基因棉株叶片显微结构观察第44页
     ·透射电镜制样第44页
     ·转基因植株Gus染色检测第44页
     ·棉花叶片DNA提取第44页
     ·转基因植株的PCR检测第44-45页
     ·转AFP-SPCEMA双价基因植株的Southern杂交检测第45页
   ·结果与分析第45-64页
     ·在无激素培养基上体胚发生的一般特征第45-47页
     ·不同材料在无激素培养基上体胚形成能力的差异第47页
     ·体胚苗种子下胚轴在不同培养基上的体胚发生情况第47-49页
     ·体胚苗种子后代的体胚发生能力第49页
     ·不同位置下胚轴的体胚发生能力第49页
     ·不同质粒及提取方法对基因枪转化胚性愈伤组织的效果第49-50页
     ·微弹射程对基因枪转化胚性愈伤组织效果的影响第50-52页
     ·受体材料的生理状态对基因枪转化胚性愈伤组织效果的影响第52页
     ·胚性愈伤组织基因枪转化后的筛选与转基因植株的获得第52页
     ·不同筛选方法对胚性愈伤组织农杆菌转化时获得转化愈伤的影响第52-53页
     ·抗性愈伤组织诱导成苗过程中不同筛选策略的效果第53-55页
     ·下胚轴的农杆菌转化获得转基因植株第55-57页
     ·不同品种对农杆菌感染的敏感性第57-58页
     ·不同诱导培养基对农杆菌转化下胚轴的效果第58-59页
     ·转CEMA基因棉株的形态特征第59-60页
     ·转CEMA基因棉株的PCR检测第60页
     ·转CEMA基因植株叶绿素含量和叶绿素a/b值的变化第60-61页
     ·转CEMA基因植株的显微结构变化第61-62页
     ·转CEMA基因棉株叶片亚显微结构的变化第62页
     ·DSB基因导入棉花胚性愈伤组织第62页
     ·AFP-SPCEMAS双价基因的导入第62-64页
     ·AFP-CHI双价基因的导入第64页
     ·SPCEMA-CHI双价基因导入棉花第64页
   ·讨论第64-71页
     ·棉花高频体胚发生材料的筛选第64-66页
     ·棉花遗传转化的方法第66-67页
     ·棉花遗传转化中的筛选策略第67-68页
     ·CEMA对棉花的伤害作用第68-69页
     ·抗病基因工程的策略第69-71页
第4章 棉花体细胞无性系变异的几个特征第71-82页
   ·材料与方法第71-72页
     ·棉花体胚的形态特征观察第71页
     ·内源植物激素IAA、ZR、ABA和GA的测定第71页
     ·再生植株田间性状观察第71页
     ·体细胞无性系变异的SSR分析第71-72页
   ·结果与分析第72-78页
     ·棉花体胚的发育模式第72-75页
     ·再生植株的性状变异第75-77页
     ·再生植株内源激素含量的变异第77页
     ·再生植株SSR扩增差异第77-78页
   ·讨论第78-82页
     ·棉花畸形体胚的形态特征及可能成因第78-80页
     ·棉花体细胞无性系变异的控制问题第80页
     ·棉花体细胞无性系变异的分子检测第80-82页
第5章 棉花花变体CHV1的形态特征及基因表达分析第82-93页
   ·材料与方法第82-83页
     ·植物材料第82页
     ·扫描电镜观察第82页
     ·基本分子生物学方法第82页
     ·棉花各器官RNA的提取第82页
     ·cDNA合成第82页
     ·RT-PCR分析第82页
     ·EST序列的电子延伸第82页
     ·cDNA片段的克隆第82-83页
     ·植物转化载体的构建第83页
     ·烟草遗传转化第83页
   ·结果与分析第83-90页
     ·CHV1的基本特征第83页
     ·CHV1和野生型棉花的花器官特征第83-86页
     ·花器官和叶状器官的扫描电镜观察第86页
     ·GhMADS1、GhMADS2、GhMADS3的克隆第86页
     ·GhMADS1、GhMADS2、GhMADS3的序列分析第86-88页
     ·GhMADS1、GhMADS2、GhMADS3的表达分析第88页
     ·用转基因技术研究GhMADS1、GhMADS2、GhMADS3的功能第88-90页
     ·GhMADS1、GhMADS2、GhMADS3在变异体CHV1花器官中的表达第90页
   ·讨论第90-93页
     ·CHV1的研究价值第90-91页
     ·CHV1的可能成因第91页
     ·植物体细胞无性系变异的研究策略第91-93页
第6章 结论与建议第93-94页
参考文献第94-106页
致谢第106-107页
在学期间所发表的文章第107页

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