| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·细胞色素P450酶概述 | 第13-16页 |
| ·细胞色素P450酶的命名 | 第13-14页 |
| ·细胞色素P450酶的分布 | 第14页 |
| ·细胞色素P450酶的催化循环机制 | 第14-15页 |
| ·细胞色素P450酶的功能 | 第15-16页 |
| ·细菌细胞色素P450酶系 | 第16-18页 |
| ·细胞色素P450酶的异源表达 | 第18-21页 |
| ·细胞色素P450酶的异源表达系统 | 第19页 |
| ·细胞色素P450酶的异源表达优化 | 第19-21页 |
| ·细胞色素P450酶在环境污染治理方面的应用 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的及研究内容 | 第22-24页 |
| 第2章 CYP102A16的克隆表达及纯化 | 第24-40页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂及试剂盒 | 第24页 |
| ·化学试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·Bacillus sp.C3基因组的提取 | 第26页 |
| ·Bacillus sp.C3细胞色素P450酶CYP102A16基因的克隆与测序 | 第26-28页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-CYP102A16的构建 | 第28-30页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·重组CYP102A16的表达 | 第31页 |
| ·亲和层析纯化重组CYP102A16 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE | 第32-33页 |
| ·重组CYP102A16的表达量测定 | 第33页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-39页 |
| ·Bacillus sp.C3 P450 CYP102A16基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·CYP102A16基因的表达纯化 | 第35-37页 |
| ·CYP102A16的序列分析 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第3章 CYP102A16的发酵条件优化 | 第40-53页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·材料及试剂 | 第40页 |
| ·仪器设备 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·重组目的菌株的转接活化 | 第40-41页 |
| ·单因素实验优化发酵条件 | 第41页 |
| ·响应面设计优化培养基 | 第41-45页 |
| ·结果和讨论 | 第45-52页 |
| ·发酵培养条件对重组菌产CYP102A16的影响 | 第45-48页 |
| ·培养基组分对重组菌产CYP102A16的影响 | 第48-50页 |
| ·重组菌的菌体生长量及其产CYP102A16量的关系 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第4章 CYP102A16酶性质研究 | 第53-68页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌种和酶液 | 第53页 |
| ·化学试剂 | 第53页 |
| ·反应缓冲液 | 第53页 |
| ·仪器设备 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·CYP102A16酶活测定体系 | 第54页 |
| ·酶的最适反应温度及热稳定性 | 第54页 |
| ·酶的最适反应pH及pH稳定性 | 第54页 |
| ·有机溶剂对酶稳定性的影响 | 第54页 |
| ·表面活性剂对CYP102A16酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·金属离子对CYP102A16酶活性的影响 | 第55页 |
| ·稳态动力学 | 第55页 |
| ·底物结合常数K_D的测定 | 第55-56页 |
| ·CYP102A16底物谱筛选 | 第56页 |
| ·全细胞催化Naphthalene的降解 | 第56页 |
| ·HPLC分析 | 第56-57页 |
| ·结果和讨论 | 第57-66页 |
| ·CYP102A16酶活性及其稳定性 | 第57-62页 |
| ·酶促反应动力学及底物结合常数K_D | 第62-64页 |
| ·CYP102A16底物谱 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-68页 |
| 第5章 结论与展望 | 第68-71页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| ·创新性 | 第69页 |
| ·展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
