| 摘要 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-26页 |
| 1 常用的目的基因克隆技术 | 第6-9页 |
| ·通过已知序列进行基因的分析、鉴定 | 第6页 |
| ·利用已知图位和标记进行克隆 | 第6-8页 |
| ·图位克隆(定位克隆) | 第6-7页 |
| ·基因标签法 | 第7-8页 |
| ·对未知序列基因的分离克隆 | 第8-9页 |
| ·直接测序法 | 第8页 |
| ·核DNA削减法 | 第8页 |
| ·cDNA文库差示筛选法 | 第8-9页 |
| ·差减杂交 | 第9页 |
| 2 基因克隆新技术 | 第9-14页 |
| ·核DNA消减-PCR法 | 第9-10页 |
| ·基因表达序列分析 | 第10页 |
| ·代表性差异分析 | 第10-11页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第11页 |
| ·cDNA直选法 | 第11-12页 |
| ·外显子捕捉法 | 第12页 |
| ·mRNA差异筛选克隆基因 | 第12页 |
| ·应用DNA芯片技术筛选新基因 | 第12-13页 |
| ·利用生物学信息技术分离克隆基因 | 第13-14页 |
| 3 差异显示技术研究进展 | 第14-26页 |
| ·DDRT-PCR的基本原理 | 第15页 |
| ·DDRT-PCR的优越性与主要缺陷 | 第15-16页 |
| ·DDRT-PCR的技术改进 | 第16-25页 |
| ·模板的选择 | 第16-17页 |
| ·引物的改进 | 第17-20页 |
| ·增大cDNA片段、减弱背景、提高专一性的改进 | 第20-21页 |
| ·真假阳性克隆的鉴定 | 第21-24页 |
| ·RFLP与区域定向的差显技术相偶联的DDRT-PCR的应用 | 第24页 |
| ·基于AFLP的RNA指纹 | 第24-25页 |
| ·差异消减展示 | 第25页 |
| ·克隆载体 | 第25-26页 |
| 材料与方法 | 第26-36页 |
| 1 材料的处理、采取 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-36页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第27页 |
| ·cDNA文库构建 | 第27-33页 |
| ·DDRT-PCR | 第33-34页 |
| ·差异条带的回收、扩增与纯化 | 第34-36页 |
| 实验结果 | 第36-43页 |
| 1 小叶杨的总RNA提取结果 | 第36-37页 |
| 2 构建cDNA文库过程中的几次检测 | 第37-39页 |
| ·从总RNA中分离出mRNA时的检测 | 第37-38页 |
| ·cDNA文库滴度检测 | 第38-39页 |
| 3 DDRT-PCR结果 | 第39-41页 |
| 4 回收产物的二次扩增结果 | 第41-42页 |
| 5 二扩产物的回收、直接测序、同源性EST分析 | 第42-43页 |
| 6 引物设计及通过PCR对差异带中假阳性的初步检测 | 第43页 |
| 讨论 | 第43-48页 |
| 1 对所建cDNA文库的质量进行分析 | 第43-45页 |
| 2 mRNA差异显示方面的讨论 | 第45-46页 |
| 3 提高差异带回收率的改进 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 英文摘要 | 第54页 |