| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第12-35页 |
| 第一章 表皮生长因子(EGF)研究进展 | 第13-24页 |
| 1 EGF概述 | 第13-14页 |
| ·发现 | 第13页 |
| ·EGF家族 | 第13页 |
| ·EGF相关蛋白 | 第13-14页 |
| 2 EGF的分子生物学 | 第14-16页 |
| ·hEGF基因 | 第14页 |
| ·hEGF多肽 | 第14-16页 |
| 3 EGF的生物学效应 | 第16-18页 |
| ·来源 | 第16页 |
| ·EGF促进伤口和角膜的修复 | 第16页 |
| ·EGF与生殖 | 第16-17页 |
| ·EGF在胃肠道的作用 | 第17页 |
| ·EGF与神经内分泌系统 | 第17-18页 |
| ·EGF与代谢 | 第18页 |
| 4 EGF的作用机制 | 第18-20页 |
| ·EGF受体(EGFR) | 第18-20页 |
| ·EGF作用过程 | 第20页 |
| 5 EGF的基因工程 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌(E.coli) | 第21页 |
| ·枯草杆菌(Bacillus subtilis) | 第21页 |
| ·短芽孢杆菌(Bacillus subtilis) | 第21-22页 |
| ·酵母菌 | 第22页 |
| ·哺乳动物细胞 | 第22页 |
| 6 EGF的临床应用价值 | 第22-24页 |
| ·EGF与创伤愈愈合 | 第22-23页 |
| ·EGF与肿瘤 | 第23页 |
| ·EGF与药物化妆品 | 第23-24页 |
| 第二章 杆状病毒表达载体系统 | 第24-33页 |
| 1 杆状病毒的生活循环 | 第24-25页 |
| 2 杆状病毒的基因及其功能 | 第25-26页 |
| ·编码多角体有关的蛋白质的基因 | 第25页 |
| ·编码病毒体结构蛋白基因 | 第25-26页 |
| 3 杆状病毒表达系统的建立及其原理 | 第26-27页 |
| 4 杆状病毒载体表达系统的改进 | 第27-28页 |
| ·重组病毒筛选方法的改进 | 第27页 |
| ·提高病毒重组效率方面的改进 | 第27-28页 |
| ·杆状病毒表达载体的改进 | 第28页 |
| 5 杆状病毒载体表达系统的特点 | 第28-30页 |
| ·杆状病毒表达系统的优点 | 第28-29页 |
| ·家蚕／BmNPV系统相对于sf细胞／AcNPV系统的优势 | 第29页 |
| ·杆状病毒表达系统存在的缺陷 | 第29-30页 |
| 6 BESV的表达水平及其影响因素 | 第30页 |
| 7 信号肽在杆状病毒表达系统中的应用 | 第30-33页 |
| ·gp67信号肽 | 第31页 |
| ·蚕素信号肽 | 第31-33页 |
| 第三章 实验设计方案 | 第33-35页 |
| 1 本实验的目的和意义 | 第33页 |
| 2 本研究的主要内容 | 第33-34页 |
| 3 实验流程图 | 第34-35页 |
| 第二部分 研究内容 | 第35-82页 |
| 第四章 家蚕杆状病毒重组转移载体的构建 | 第36-48页 |
| 1 材料和方法 | 第36-44页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·方法 | 第38-44页 |
| ·PCR扩增gp67信号肽基因 | 第38页 |
| ·PCR扩增hEGF基因 | 第38-39页 |
| ·PCR产物纯化 | 第39页 |
| ·PCR产物酶切 | 第39-40页 |
| ·酶切PCR产物热失活 | 第40页 |
| ·载体pBacPAK8的酶切 | 第40页 |
| ·低溶点胶回收目的片段 | 第40-41页 |
| ·连接反应 | 第41页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第41-42页 |
| ·质粒的抽提(碱法) | 第42页 |
| ·核酸电泳 | 第42页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第42-44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·重组转移载体pBacPAKS-hEGF的构建 | 第44-46页 |
| ·转移载体pBacPAK8的图谱 | 第44-45页 |
| ·重组转移载体pBacPAKS-hEGF的构建 | 第45-46页 |
| ·重组转移载体pBacPAKS-hEGF的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组转移载体pBAcPAKS-hEGF测序结果 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 重组家蚕杆状病毒的筛选和鉴定 | 第48-61页 |
| 1 材料和方法 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·方法 | 第50-57页 |
| ·细胞培养与冻存 | 第50页 |
| ·病毒培养 | 第50页 |
| ·病毒滴度测定(终点稀释法) | 第50页 |
| ·Bm-BacPAK6 DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·Bm-BacPAK6 DNA酶切线性化 | 第51页 |
| ·重组转移质粒与线性化病毒DNA共转染 | 第51-52页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第52页 |
| ·重组病毒的Southern杂交鉴定 | 第52-56页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-60页 |
| ·病毒Bm-BacPAK6 DNA的线性化 | 第57-58页 |
| ·共转染及重组病毒的筛选 | 第58页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组病毒的sourthen杂交鉴定 | 第59页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 融合基因在家蚕培养细胞、幼虫中表达及活性测定 | 第61-82页 |
| 1 材料与方法 | 第61-68页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·方法 | 第63-68页 |
| ·细胞培养 | 第63-64页 |
| ·gp67-hEGF融合基因在家蚕培养细胞中的表达 | 第64页 |
| ·gp67-hEGF融合基因在家蚕幼虫体内的表达 | 第64页 |
| ·ELISA检测 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第65-66页 |
| ·Western blotting(参照分子克隆实验指南) | 第66-67页 |
| ·Balb／c3T3细胞测活 | 第67页 |
| ·新生小鼠睁眼萌齿实验 | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-80页 |
| ·ELISA检测家蚕细胞与家蚕幼虫在不同时间表达产物的水平 | 第68-71页 |
| ·ELISA检测家蚕细胞在不同时间表达产物的水平 | 第68-69页 |
| ·ELISA检测幼虫表达产物 | 第69-71页 |
| ·表达产物的Western blotting | 第71页 |
| ·Balb／c3T3细胞测活 | 第71-78页 |
| ·细胞表达产物的体外测活 | 第72-75页 |
| ·幼虫表达产物的体外测活 | 第75-78页 |
| ·新生小鼠睁眼萌齿实验 | 第78-80页 |
| ·新生小鼠体重增长的差异 | 第78页 |
| ·新生小鼠萌牙日龄的差异 | 第78-79页 |
| ·新生小鼠睁眼日龄的差异 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 英文摘要 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 附录 | 第90页 |
