| 摘要 | 第1-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-21页 |
| 1. 跃变型果实和非跃变型果实成熟的生理差异 | 第9-10页 |
| 2. 果实成熟衰老的基因调控 | 第10-18页 |
| ·果实成熟衰老的分子生物学基础 | 第10-14页 |
| ·乙烯生成有关的酶及基因 | 第10-13页 |
| ·细胞壁结构相关的酶及基因 | 第13-14页 |
| ·果实成熟的调控研究 | 第14-18页 |
| ·反义RNA 的特点及其在果实成熟调控中的应用 | 第14-17页 |
| ·果实成熟过程中乙烯合成前体的抑制 | 第17-18页 |
| 3. 草莓果实成熟过程中的相关基因及植物膜联蛋白基因研究进展 | 第18-21页 |
| ·草莓果实成熟过程中的基因表达及相关基因研究 | 第18页 |
| ·植物膜联蛋白基因研究进展 | 第18-21页 |
| ·膜联蛋白研究概况 | 第18-19页 |
| ·植物膜联蛋白基因研究进展 | 第19-21页 |
| 第一部分 草莓果实RNA 提取方法的研究 | 第21-26页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-23页 |
| ·试材 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·RNA 提取试剂 | 第21页 |
| ·RT-PCR 试剂 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| ·植物RNA 的提取 | 第22页 |
| ·RNA 纯度及完整性检测 | 第22-23页 |
| ·RNA 逆转录活性的检测 | 第23页 |
| 2. 结果与分析 | 第23-24页 |
| ·RNA 完整性检测 | 第23页 |
| ·植物RNA 的提取纯度 | 第23-24页 |
| ·草莓果实 RNA 的逆转录活性检测 | 第24页 |
| 3. 讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 草莓果实膜联蛋白基因的克隆及其反义融合基因的构建 | 第26-54页 |
| 1. 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·试材 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌种及质粒 | 第26页 |
| ·酶及试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·基本分子生物学实验 | 第27-36页 |
| ·RJ4 cDNA 的合成及克隆 | 第36-37页 |
| ·5'-端未知序列的克隆 | 第37-39页 |
| ·RJ4 反义基因植物表达载体及工程菌的构建 | 第39页 |
| 2. 结果与分析 | 第39-49页 |
| ·RJ4 cDNA 的克隆 | 第39-43页 |
| ·目的片段的RT-PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·目的片段与载体的连接及转化 | 第40页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·目的片段的DNA 序列分析 | 第40-41页 |
| ·克隆载体PGRJ4 的限制性内切酶图谱及鉴定 | 第41-43页 |
| ·草莓果实膜联蛋白(AnnFaF)cDNA 5'-端未知序列克隆 | 第43-45页 |
| ·AnnFaF cDNA 5'-端未知序列的PCR 扩增 | 第43-45页 |
| ·5'-端RACE 产物的序列分析 | 第45页 |
| ·AnnFaF 反义基因的构建 | 第45-49页 |
| ·AnnFaF 反义基因植物表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·AnnFaF 反义基因重组质粒的PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体pRRJ4 的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·AnnFaF 反义基因工程菌的构建 | 第49页 |
| ·双元载体向农杆菌的导入 | 第49页 |
| ·工程菌的鉴定 | 第49页 |
| 3. 讨论 | 第49-54页 |
| ·植物中间表达载体重组子的筛选 | 第49-50页 |
| ·双元载体向根癌农杆菌(A.tumefaciens)的直接导入 | 第50页 |
| ·cDNA 5'-端未知序列的快速克隆 | 第50-51页 |
| ·草莓果实膜联蛋白(AnnFaF)基因5'-端未知序列及完整读码框的获得 | 第51-54页 |
| 第三部分 草莓果实膜联蛋白反义融合基因遗传转化的研究 | 第54-68页 |
| 1. 材料与方法 | 第54-61页 |
| ·试材 | 第54页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·工程菌株及载体 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-61页 |
| ·培养基配制 | 第54页 |
| ·无菌苗继代培养 | 第54-55页 |
| ·外源基因转化 | 第55页 |
| ·转基因植株的Southern Blotting 分析 | 第55-61页 |
| 2. 结果与分析 | 第61-65页 |
| ·AnnFaF 反义融合基因转化烟草的研究 | 第61-63页 |
| ·烟草转化芽的获得 | 第61页 |
| ·烟草转化芽的Km 抗性分析 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草的Southern Blotting 分析 | 第62-63页 |
| ·AnnFaF 反义融合基因转化草莓的研究 | 第63-65页 |
| ·草莓转化芽的获得 | 第63-64页 |
| ·草莓转化芽的Km 抗性分析 | 第64-65页 |
| ·转基因草莓的PCR-Southern 检测 | 第65页 |
| 3. 讨论 | 第65-68页 |
| ·工程菌菌株对转化效率的影响 | 第65-67页 |
| ·植物材料基因型、生理状态对遗传转化的影响 | 第67-68页 |
| 结语 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| ABSTRACT | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
