水稻OsHSP基因表达分析与遗传转化研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-15页 |
| ·植物HSPs的种类 | 第9页 |
| ·植物HSPs的诱导表达 | 第9-10页 |
| ·逆境胁迫下HSPs的生物学功能 | 第10-11页 |
| ·维持天然蛋白结构的稳定 | 第10页 |
| ·维护生物膜结构稳定 | 第10-11页 |
| ·维持ROS平衡 | 第11页 |
| ·HSPs与作物改良研究进展 | 第11-13页 |
| ·HSPs与作物耐热性的改良 | 第11-12页 |
| ·HSPs与作物耐冷性的改良 | 第12页 |
| ·HSPs与作物耐旱性的改良 | 第12-13页 |
| ·水稻HSPs研究现状 | 第13页 |
| ·本课题的研究背景、目的及意义 | 第13-15页 |
| 第二章 9个OsHSP基因表达特征分析 | 第15-27页 |
| 1 材料 | 第15页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·缓冲液 | 第15页 |
| ·酶和其他试剂 | 第15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15页 |
| 2 实验方法 | 第15-20页 |
| ·候选基因的选取 | 第15-16页 |
| ·候选基因的进化分析 | 第16-17页 |
| ·引物设计 | 第17-18页 |
| ·表达分析的材料准备 | 第18页 |
| ·水稻组织总RNA提取 | 第18页 |
| ·基因表达模式的半定量RT-PCR分析 | 第18-20页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第18-19页 |
| ·模板浓度的调整 | 第19页 |
| ·RT-PCR分析 | 第19-20页 |
| 3 结果与分析 | 第20-25页 |
| ·候选基因的系统树分析 | 第20-21页 |
| ·9个OsHSP在水稻不同器官中的表达分析 | 第21页 |
| ·不同逆境胁迫下9个OsHSP的表达特征研究 | 第21-25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| ·OsHSP表达具有组织特异性 | 第25页 |
| ·不同逆境胁迫及ABA处理下OsHSP的表达特征 | 第25-27页 |
| 第三章 表达载体的构建及对水稻的遗传转化 | 第27-46页 |
| 1 试验材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·工具酶和其它试剂 | 第27页 |
| ·常用实验仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| 2 试验方法 | 第28-38页 |
| ·引物设计 | 第28-30页 |
| ·过表达载体和RNAi表达载体的构建 | 第30-36页 |
| ·过表达载体构建技术路线 | 第30-31页 |
| ·RNAi表达载体构建技术路线 | 第31-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR扩增片段与p1300M载体的重组 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌细胞的热激法转化 | 第34-35页 |
| ·转化子的检测 | 第35页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第35页 |
| ·农杆菌细胞的冻融法转化与检测 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第36-37页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第36页 |
| ·农杆菌菌液的准备 | 第36页 |
| ·愈伤组织与根癌农杆菌的共培养 | 第36页 |
| ·洗除农杆菌 | 第36-37页 |
| ·抗性愈伤组织筛选和植株再生 | 第37页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第37-38页 |
| ·水稻叶片总DNA的提取 | 第37页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第37-38页 |
| ·半定量PT-PCR分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·表达载体的验证 | 第39-41页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第41页 |
| ·DNA水平PCR检测 | 第41-42页 |
| ·转录水平RT-PCR检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·愈伤状态对转化的影响 | 第44页 |
| ·湿度对愈伤生长的影响 | 第44页 |
| ·载体转化未能分化出抗性苗的可能原因 | 第44页 |
| ·转化的周期和效率 | 第44-46页 |
| 第四章 总结及下一步研究设想 | 第46-47页 |
| 1 结论 | 第46页 |
| 2 下一步研究设想 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录2 本研究中所用的基本培养基配方 | 第55-56页 |
| 附录3 缩写词 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
