| 致谢 | 第1-14页 |
| 缩写词 | 第14-17页 |
| 摘要 | 第17-20页 |
| Abstract | 第20-23页 |
| 前言 | 第23-25页 |
| 1 文献综述 | 第25-43页 |
| ·植物雄性不育的细胞学与生理生化研究进展 | 第25-30页 |
| ·植物雄性不育的细胞学研究 | 第26-29页 |
| ·雄性败育的主要时期 | 第26-27页 |
| ·雄性败育的主要表现及鉴定方法 | 第27-28页 |
| ·花药壁发育与雄性败育 | 第28-29页 |
| ·植物雄性不育的生理生化研究 | 第29-30页 |
| ·植物花粉发育的分子生物学研究进展 | 第30-33页 |
| ·植物花粉发育相关基因的克隆与研究 | 第31-33页 |
| ·与花粉发育起始相关基因的研究 | 第31-32页 |
| ·与小孢子母细胞发育相关基因的研究 | 第32-33页 |
| ·与花粉有丝分裂相关的基因的研究 | 第33页 |
| ·反义技术和RNA干涉技术的研究 | 第33-38页 |
| ·反义RNA技术 | 第33-35页 |
| ·反义RNA的作用原理 | 第34页 |
| ·反义RNA的设计 | 第34-35页 |
| ·反义RNA技术的应用 | 第35页 |
| ·RNA干涉技术 | 第35-38页 |
| ·RNA干涉的作用机制 | 第35-36页 |
| ·RNA干涉技术的一般技术路线 | 第36-37页 |
| ·RNA干涉技术的应用 | 第37-38页 |
| ·快速碱化因子的研究进展 | 第38-43页 |
| ·快速碱化因子的同源基因与表达 | 第38-39页 |
| ·快速碱化因子的同源基因及特征 | 第38-39页 |
| ·快速碱化因子基因的表达 | 第39页 |
| ·快速碱化因子多肽的结构 | 第39-40页 |
| ·快速碱化因子的生理作用 | 第40-43页 |
| ·使培养基快速碱化 | 第40页 |
| ·诱导胞内有丝分裂蛋白激酶合成 | 第40页 |
| ·抑制根的生长 | 第40-41页 |
| ·其它 | 第41-43页 |
| 2 白菜花粉发育相关新基因BcMF13的克隆及序列分析 | 第43-55页 |
| ·材料与方法 | 第43-46页 |
| ·植物材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取及反转录 | 第44页 |
| ·差异片段的5'RACE和3'RACE扩增 | 第44-45页 |
| ·cDNA和DNA序列全长的扩增 | 第45页 |
| ·序列分析 | 第45页 |
| ·表达分析 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-53页 |
| ·A8T4片段分析后发现正义链 | 第46页 |
| ·A8T4的5'RACE扩增 | 第46-47页 |
| ·A8T4的5'RACE测序分析 | 第47页 |
| ·A8T4的3'RACE扩增 | 第47-48页 |
| ·A8T4的3'RACE扩增片段的测序分析 | 第48-49页 |
| ·BcMF13 cDNA和DNA序列全长的获得 | 第49-51页 |
| ·BcMF13的序列特征分析 | 第51-52页 |
| ·BcMF13的表达分析 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 3 几种芸薹属蔬菜BcMF13同源基因的克隆及进化分析 | 第55-65页 |
| ·材料与方法 | 第55-57页 |
| ·试验材料 | 第55-56页 |
| ·DNA的提取及同源基因的克隆 | 第56页 |
| ·BcMF13同源基因的序列差异分析 | 第56页 |
| ·同源基因的进化分析 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·BcMF13同源序列的扩增和克隆 | 第57页 |
| ·BcMF13同源基因的序列特征分析 | 第57-59页 |
| ·BcMF13同源基因的序列比对 | 第59-61页 |
| ·芸薹属BcMF13同源基因序列的遗传距离分析 | 第61页 |
| ·芸薹属BcMF13同源基因的分子进化 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·BcMF13是芸薹属中广泛存在的一类保守性基因 | 第62页 |
| ·BcMF13同源基因的进化 | 第62-65页 |
| 4 白菜花粉发育相关新基因BcMF13的功能分析 | 第65-91页 |
| ·材料与方法 | 第65-75页 |
| ·植物材料与试剂 | 第65-66页 |
| ·RNAi载体构建 | 第66-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第66页 |
| ·正义片段和反义片段的获得 | 第66-67页 |
| ·反义片段和正义片段的制备 | 第67页 |
| ·双元载体pBI121制备 | 第67页 |
| ·表达质粒的构建 | 第67页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第67-68页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·反义RNA载体的构建 | 第68-70页 |
| ·菌株与质粒 | 第68页 |
| ·反义RNA载体的构建流程 | 第68-69页 |
| ·获取反义片段 | 第69-70页 |
| ·双元载体pBI121制备 | 第70页 |
| ·表达质粒的构建 | 第70页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第70页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第70页 |
| ·转基因植株的获得 | 第70-72页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70-71页 |
| ·播种 | 第71页 |
| ·预培养 | 第71页 |
| ·共培养 | 第71页 |
| ·分化培养 | 第71页 |
| ·继代及生根培养 | 第71页 |
| ·练苗与移栽 | 第71-72页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第72-74页 |
| ·植物材料及试剂 | 第72页 |
| ·转基因植株基因组DNA和总RNA的提取 | 第72-73页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第73页 |
| ·转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第73-74页 |
| ·转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第74页 |
| ·转基因植株的花粉发育的形态学与细胞学观察 | 第74-75页 |
| ·试验材料及试剂 | 第74页 |
| ·转基因植株花粉的扫描及透射电镜观察 | 第74页 |
| ·转基因植株花粉生活力观察 | 第74-75页 |
| ·转基因植株的花粉萌发试验 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-89页 |
| ·获得BcMF13 RNAi载体 | 第75-77页 |
| ·获得BcMF13正义片段和反义片段 | 第75-76页 |
| ·BcMF13干涉载体在农杆菌中的鉴定 | 第76-77页 |
| ·获得BcMF13 RNA反义载体 | 第77-78页 |
| ·获得BcMF13反义片段 | 第77-78页 |
| ·BcMF13的35S-PBI121反义表达载体在农杆菌中的鉴定 | 第78页 |
| ·获得BcMF13反义载体和干涉载体菜心转化植株 | 第78页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体转基因植株的分子检测 | 第78-80页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株的总DNA提取 | 第78-79页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株的PCR检测 | 第79-80页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株的Southern杂交检测 | 第80页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株的Northern杂交检测 | 第80页 |
| ·BcMF13菜心反义载体和干涉载体转基因植株花粉发育的形态和细胞学观察 | 第80-89页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉发育的形态学观察 | 第80-83页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉的扫描电镜观察 | 第83-84页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉的透射电镜观察 | 第84-86页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉苯胺蓝染色观察 | 第86页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉DAPI染色观察 | 第86-87页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉体外萌发观察 | 第87-89页 |
| ·BcMF13反义载体和干涉载体菜心转基因植株花粉柱头萌发观察 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| ·BcMF13是一个新的白菜花粉发育相关基因 | 第89页 |
| ·BcMF13在白菜花粉发育过程中的功能 | 第89-91页 |
| 5 白菜花粉发育相关的快速碱化因子基因BcMF14的克隆及分析 | 第91-103页 |
| ·材料与方法 | 第91-93页 |
| ·植物材料与试剂 | 第91页 |
| ·5'RACE和3'RACE扩增 | 第91-92页 |
| ·cDNA和DNA序列全长的扩增 | 第92页 |
| ·序列分析 | 第92页 |
| ·表达分析 | 第92-93页 |
| ·结果与分析 | 第93-100页 |
| ·A9T15片段的分析 | 第93页 |
| ·A9T15的5'RACE扩增 | 第93页 |
| ·A9T15的5'RACE测序分析 | 第93-94页 |
| ·A9T15的3'RACE扩增 | 第94-95页 |
| ·A9T15的3'RACE测序分析 | 第95-96页 |
| ·BcMF14基因cDNA和DNA序列全长的获得 | 第96-97页 |
| ·BcMF14的序列特征分析 | 第97-100页 |
| ·BcMF14的表达分析 | 第100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| 6 十字花科植物BcMF14同源基因的克隆及进化分析 | 第103-113页 |
| ·材料与方法 | 第103-105页 |
| ·试验材料 | 第103页 |
| ·DNA的提取及同源基因的克隆 | 第103-104页 |
| ·同源基因的序列差异分析 | 第104-105页 |
| ·同源基因的进化分析 | 第105页 |
| ·结果与分析 | 第105-111页 |
| ·BcMF14同源序列的扩增和克隆 | 第105-108页 |
| ·BcMF14同源基因的碱基序列分析 | 第108页 |
| ·十字花科BcMF14同源基因氨基酸的序列分析 | 第108-109页 |
| ·BcMF14同源基因的核苷酸序列比对 | 第109页 |
| ·十字花科植物BcMF14基因的进化关系 | 第109-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| ·快速碱化因子基因在十字花科植物中广泛存在 | 第111页 |
| ·十字花科植物BcMF14同源基因的系统进化 | 第111-113页 |
| 7 白菜花粉发育相关的快速碱化因子基因BcMF14的功能分析 | 第113-135页 |
| ·材料与方法 | 第113-118页 |
| ·BcMF14基因反义载体的构建 | 第113-115页 |
| ·菌株与质粒 | 第113-114页 |
| ·反义片段的获得 | 第114页 |
| ·双元载体pBI121制备 | 第114页 |
| ·表达质粒的构建 | 第114-115页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第115页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第115页 |
| ·转基因植株的获得 | 第115-116页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第115页 |
| ·培养基 | 第115页 |
| ·播种 | 第115页 |
| ·预培养 | 第115页 |
| ·共培养 | 第115页 |
| ·分化培养 | 第115-116页 |
| ·继代及生根培养 | 第116页 |
| ·练苗、移栽 | 第116页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第116-117页 |
| ·植物材料及试剂 | 第116页 |
| ·转反义基因植株基因组DNA和总RNA的提取 | 第116页 |
| ·转反义基因植株的PCR检测 | 第116页 |
| ·转反义基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第116-117页 |
| ·转反义基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第117页 |
| ·转反义基因植株小孢子发育的形态学与细胞学观察 | 第117页 |
| ·试验材料 | 第117页 |
| ·转反义基因植株花粉的扫描电镜观察 | 第117页 |
| ·转反义基因植株花粉的透射电镜观察 | 第117页 |
| ·转反义基因植株花粉的细胞学观察 | 第117页 |
| ·转反义基因植株花粉生活力观察 | 第117-118页 |
| ·转反义基因植株花粉苯胺蓝染色观察 | 第117-118页 |
| ·转反义基因植株花粉DAPI染色观察 | 第118页 |
| ·转反义基因植株的花粉萌发试验 | 第118页 |
| ·转反义基因植株花粉体外萌发观察 | 第118页 |
| ·转反义基因植株花粉柱头萌发观察 | 第118页 |
| ·结果与分析 | 第118-131页 |
| ·获得BcMF14反义片段及其载体 | 第118-120页 |
| ·获得BcMF14反义片段 | 第118-119页 |
| ·BcMF14反义载体的构建及在农杆菌中质粒的鉴定 | 第119-120页 |
| ·获得菜心反义BcMF14转化植株 | 第120页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的分子检测 | 第120-122页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的总DNA提取 | 第120页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的PCR检测 | 第120-121页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的Southern杂交检测 | 第121页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的Northern杂交检测 | 第121-122页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉发育的形态和细胞学观察 | 第122-127页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉的扫描电镜观察 | 第122-124页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉的透射电镜观察 | 第124-125页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉的细胞学观察 | 第125-127页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉生活力观察 | 第127页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉苯胺蓝染色观察 | 第127页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉DAPI染色观察 | 第127页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株的花粉萌发试验 | 第127-131页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉体外萌发观察 | 第128页 |
| ·菜心反义BcMF14转基因植株花粉柱头萌发观察 | 第128-131页 |
| ·讨论 | 第131-135页 |
| ·BcMF14是一个新的白菜快速碱化因子类基因 | 第131页 |
| ·CaMV35S和BcA9启动子在菜心花粉中的活性 | 第131-132页 |
| ·BcMF14在白菜花粉发育过程中的可能功能 | 第132-135页 |
| 结论 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-151页 |
| 博士期间发表的论文 | 第151页 |
