| 缩略语表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 文献回顾 | 第14-29页 |
| (一) 汉坦病毒(HV)感染疾病治疗研究进展 | 第14-17页 |
| (二) 单链抗体融合蛋白在生物治疗中的应用 | 第17-22页 |
| (三) 靶向性非病毒载体系统介导的基因转移 | 第22-26页 |
| (四) siRNA的研究进展 | 第26-29页 |
| 正文 | 第29-62页 |
| 第一部分 抗HV单链抗体/ Cκ/protamine截短体融合蛋白的基因构建 | 第29-41页 |
| 1. 实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要溶液配制 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-38页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第32页 |
| ·ScFv及ScFv-Cκ基因的获得 | 第32-34页 |
| ·ScFv及ScFv-Cκ、ScFv-Cκ-tP基因的扩增及纯化 | 第34-35页 |
| ·基因重组表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·宿主菌的转化 | 第37页 |
| ·挑取阳性克隆,鉴定并测序 | 第37-38页 |
| 3. 实验结果 | 第38-41页 |
| ·重组质粒的结构 | 第38页 |
| ·ScFv及ScFv-Cκ基因获得 | 第38-39页 |
| ·目的基因的扩增及鉴定 | 第39-41页 |
| 第二部分 抗HV单链抗体/ Cκ/protamine截短体融合蛋白的表达、纯化 | 第41-55页 |
| 1. 实验材料 | 第41-44页 |
| ·菌种与质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要溶液配制 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| 2. 实验方法 | 第44-49页 |
| ·融合蛋白基因的诱导表达与鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组融合蛋白表达的可溶性分析 | 第45页 |
| ·表达产物的Western blot鉴定 | 第45-46页 |
| ·表达产物的纯化 | 第46-47页 |
| ·纯化蛋白的定量和保存 | 第47-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-55页 |
| ·融合基因的诱导表达与鉴定 | 第49-51页 |
| ·重组融合蛋白表达的可溶性分析 | 第51页 |
| ·表达产物的Western blot鉴定 | 第51-52页 |
| ·表达产物的纯化 | 第52-53页 |
| ·纯化蛋白的定量 | 第53-55页 |
| 第三部分 抗HV单链抗体/ Cκ/protamine截短体融合蛋白功能的研究 | 第55-62页 |
| 1. 试验材料 | 第55-57页 |
| ·细胞系及病毒株 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要溶液配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56-57页 |
| 2. 实验方法 | 第57-59页 |
| ·表达产物抗原结合活性的细胞ELISA检测 | 第57页 |
| ·表达产物的DNA结合活性检测 | 第57页 |
| ·直接免疫荧光检测融合蛋白的内化活性 | 第57-59页 |
| 3. 实验结果 | 第59-62页 |
| ·表达产物的抗原结合活性的细胞ELISA检测 | 第59页 |
| ·表达产物的DNA结合活性检测 | 第59-60页 |
| ·蛋白的内化活性分析 | 第60-62页 |
| 讨论 | 第62-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 个人简历和研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |