| 目录 | 第1-12页 |
| 图表索引 | 第12-15页 |
| 英文缩略词 | 第15-16页 |
| 中文摘要 | 第16-19页 |
| 英文摘要 | 第19-23页 |
| 前言 | 第23-25页 |
| 第一部分 结肠癌肝转移相关分子的筛选鉴定 | 第25-93页 |
| 摘要 | 第25-29页 |
| 前言 | 第29-30页 |
| 一.材料方法 | 第30-51页 |
| (一) 实验材料 | 第30-46页 |
| 1.细胞系 | 第30页 |
| 2.组织标本 | 第30-39页 |
| 3.实验动物及饲养条件 | 第39-40页 |
| 4.抗体 | 第40页 |
| 5.常用试剂及耗材 | 第40-43页 |
| 6.RT-PCR引物(英俊公司合成) | 第43-44页 |
| 7.主要仪器及厂家 | 第44-45页 |
| 8.计算机分析软件 | 第45-46页 |
| (二) 实验方法 | 第46-51页 |
| 1.细胞培养 | 第46页 |
| 2.细胞总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.RT-PCR | 第47-48页 |
| 4.细胞蛋白的提取 | 第48页 |
| 5.细蛋白定量-BCA法 | 第48页 |
| 6.WESTERN BLOT | 第48-49页 |
| 7.免疫组织化学检测 | 第49-50页 |
| 8.统计方法 | 第50-51页 |
| 二.实验结果 | 第51-86页 |
| (一) ONCOMINE的数据库分析筛选预示结肠癌肝转移的相关分子 | 第51-58页 |
| 1.KI_COLON数据的荟萃分析 | 第52-53页 |
| 2.BITTNER_COLON数据分析 | 第53-54页 |
| 3.GRAUDENS_COLON数据分析 | 第54-55页 |
| 4.数据库的联合分析 | 第55-57页 |
| 5.预示结肠癌肝转移候选标志物的确定 | 第57-58页 |
| (二) 与人肝窦内皮高黏附高肝转移模型的建立 | 第58-69页 |
| ·种结肠癌细胞与人肝窦内皮体外黏附实验 | 第58-59页 |
| 2.体外筛选与肝窦内皮高黏附的结肠癌亚细胞系SW1116P21 | 第59-61页 |
| 3.高黏附结肠癌细胞SW1116P21生物学特性分析 | 第61-65页 |
| (1) 体外黏附能力的分析 | 第61-62页 |
| (2) 体外侵袭能力的的分析 | 第62页 |
| (3) 体外增殖能力的分析 | 第62-63页 |
| (4) 体外克隆形成的分析 | 第63页 |
| (5) 细胞形态 | 第63-64页 |
| (6) 高黏附结肠癌细胞SW1116P21体内致瘤实验 | 第64页 |
| (7) 实验性肝转移分析 | 第64-65页 |
| 4.高黏附高肝转移结肠癌亚细胞系SW1116P21基因表达谱分析 | 第65-69页 |
| (三) 人结肠癌原发瘤与配对肝转移灶的组织基因表达谱差异分析 | 第69-75页 |
| 1.结肠癌及肝转移病例及组织标本采集 | 第69页 |
| 2.结肠癌原发瘤及肝转移组织基因表达谱差异基因芯片分析 | 第69-70页 |
| 3.结肠癌原发瘤以及配对肝转移标本差异基因的生物信息学分析 | 第70-71页 |
| 4.差异基因的SAM聚类分析 | 第71-74页 |
| 5.RT-PCR验证候选差异表达基因 | 第74-75页 |
| (四) 预示结肠癌肝转移的相关分子标志物的汇总 | 第75-76页 |
| (五) 预示结肠癌肝转移候选分子标志物的初筛 | 第76-78页 |
| 1.候选标志物的检测 | 第76-78页 |
| (六) 预示结肠癌肝转移分子标志物的鉴定与确证 | 第78-86页 |
| 1.候选标志物以及临床因素的逻辑回归分析 | 第78-79页 |
| 2.候预示结肠癌肝转移分子标志物与临床病理参数的判别分析 | 第79-80页 |
| 3.ROC曲线分析各指标对结肠癌肝转移预测能力的评价 | 第80页 |
| 4.OPN、SNCG、CCL2的表达与结肠癌预后的关系 | 第80-81页 |
| 5.OPN、SNCG、CCL2在结肠癌组织中的表达 | 第81-83页 |
| 6.OPN、SNCG、CCL2与结肠癌临床病理分析 | 第83-86页 |
| 讨论 | 第86-91页 |
| 小结 | 第91-93页 |
| 第二部分 结肠癌肝转移相关基因P-CADHERIN的功能及分子机制的研究 | 第93-130页 |
| 摘要 | 第93-94页 |
| 前言 | 第94-96页 |
| 一.材料与方法 | 第96-107页 |
| (一).实验材料 | 第96-101页 |
| 1.细胞系及培养条件 | 第96页 |
| 2.实验动物及饲养条件 | 第96页 |
| 3.实菌株与质粒 | 第96-98页 |
| 4.主要试剂 | 第98-101页 |
| 5.PCR引物(由INVITROGEN合成) | 第101页 |
| (二).实验方法 | 第101-107页 |
| 1.RT-PCR分析 | 第101页 |
| 2.WESTERN BLOTTING | 第101页 |
| 3.免疫组织化学检测 | 第101页 |
| 4.质粒构建、细菌转化及质粒提取 | 第101-103页 |
| 5.细胞体外实验 | 第103-105页 |
| (1) 哺乳动物细胞转染 | 第103-104页 |
| (2) 细胞聚集实验 | 第104页 |
| (3) 细胞增殖分析 | 第104页 |
| (4) 划痕迁移实验 | 第104页 |
| (5) TRANSWELL迁移、侵袭分析 | 第104-105页 |
| (6) 软琼脂集落形成实验 | 第105页 |
| 6.动物实验 | 第105-106页 |
| (1) 裸鼠致瘤实验 | 第105页 |
| (2) 实验性转移 | 第105-106页 |
| 7.统计方法 | 第106-107页 |
| 二.实验结果 | 第107-126页 |
| (一) 结肠癌肝转移过表达基因的筛选 | 第107-110页 |
| (二) P-cadherin基因在结肠癌的功能研究 | 第110-120页 |
| 1.P-cadherinRNAi对结肠癌细胞Lovo的功能的影响 | 第110-118页 |
| (1) P-CADHERIN SHRNA质粒构建 | 第110-111页 |
| (2) 稳定转染敲降细胞克隆的筛选与鉴定 | 第111-112页 |
| (3) P-cadherin RNAi对Lovo细胞黏附的影响 | 第112页 |
| (4) P-cadherin RNAi对Lovo细胞运动的影响 | 第112-114页 |
| (5) P-cadherin RNAi对Lovo细胞增殖的影响 | 第114-115页 |
| (6) 克隆形成能力的影响 | 第115-116页 |
| (7) P-cadherin RNAi对Lovo细胞裸鼠致瘤实验的影响 | 第116-117页 |
| (8) P-cadherin RNAi对Lovo细胞肝转移的影响 | 第117-118页 |
| 2.转染P-cadherin对3T3细胞的影响 | 第118-120页 |
| (1) P-cadherin表达质粒的构建 | 第118页 |
| (2) P-cadherin对3T3克隆形成的影响 | 第118-119页 |
| (3) P-cadherin增殖的影响 | 第119-120页 |
| (4) P-cadherin对3T3细胞裸鼠致瘤实验的影响 | 第120页 |
| (三) P-cadherin基因促进结肠癌肝转移的分子机制 | 第120-126页 |
| 1.P-cadherin RNAi对Lovo细胞中β-catenin的影响 | 第120-122页 |
| (1) Western blot检测 | 第121页 |
| (2) 固定细胞免疫荧光检测 | 第121-122页 |
| 2.P-cadherin RNAi对Lovo细胞中E-cadherin的影响 | 第122-123页 |
| (1) Western blot检测 | 第122-123页 |
| (2) 细胞免疫荧光检测 | 第123页 |
| 3.P-cadherin、E-cadherin以及β-catenin的临床相关性分析 | 第123-126页 |
| (1) E-cadherin以及β-catenin的表达 | 第123-125页 |
| (2) P-cadherin、E-cadherin和β-catenin的临床相关性 | 第125-126页 |
| 讨论 | 第126-129页 |
| 小结 | 第129-130页 |
| 全文小结 | 第130-132页 |
| 综述 结肠癌肝转移相关分子机制研究进展 | 第132-156页 |
| 一.介导结肠癌转移的分子机制 | 第132-151页 |
| (一) 细胞外基质的降解 | 第132-137页 |
| 1.基质金属蛋白酶及其抑制剂 | 第133-135页 |
| (1) MMP-3 | 第133页 |
| (2) MMP-7 | 第133-134页 |
| (3) MMP-9 | 第134页 |
| (4) 基质金属蛋白酶抑制剂 | 第134-135页 |
| 2.丝氨酸蛋白酶类 | 第135-136页 |
| 3.天门冬酰胺蛋白酶类 | 第136页 |
| 4.半胱氨酸蛋白酶类 | 第136-137页 |
| (二) 细胞粘附性的改变 | 第137-142页 |
| 1.整合素 | 第137-138页 |
| 2.钙黏蛋白 | 第138-139页 |
| (1) E-cadherin | 第138页 |
| (2) N-cadherin | 第138-139页 |
| (3) LI-cadherin | 第139页 |
| 3.免疫球蛋白超家族 | 第139-140页 |
| (1) ICAM-1 | 第139页 |
| (2) VCAM-1 | 第139-140页 |
| (3) CEA | 第140页 |
| 4.选择素 | 第140-141页 |
| (1) E-Selectin | 第140-141页 |
| (2) P-Selectin | 第141页 |
| (3) L-Selectin | 第141页 |
| 5.其他黏附分子 | 第141-142页 |
| (1) 骨桥蛋白 | 第141页 |
| (2) CD44 | 第141-142页 |
| (三) 细胞凋亡 | 第142-143页 |
| 1.FAS/FASL | 第142-143页 |
| 2.TRAIL | 第143页 |
| 3.CASPASE-3 | 第143页 |
| (四) 肿瘤新生血管生成 | 第143-145页 |
| 1.VEGF | 第144页 |
| 2.ANG-2 | 第144-145页 |
| 3.COX-2 | 第145页 |
| 4.IGF-Ⅰ | 第145页 |
| (五) 趋化因子及其受体 | 第145-147页 |
| 1.CXCL12-CXCR4 | 第146页 |
| 2.CXCR1/CXCL8 | 第146-147页 |
| 3.CCL19/CCL21/CCR7 | 第147页 |
| 4.IL-8 | 第147页 |
| (六) 酪氨酸激酶受体家族 | 第147-149页 |
| 1.EGFR | 第147-148页 |
| 2.IGF-IR | 第148页 |
| 3.C-MET | 第148-149页 |
| 4.FGFR | 第149页 |
| 5.PDGFR | 第149页 |
| (七) 转移抑制基因 | 第149-151页 |
| 1.NM23 | 第150页 |
| 2.KAI1 | 第150页 |
| 3.MRP1/CD9 | 第150-151页 |
| 4.DRG-1 | 第151页 |
| 二.研究结肠癌转移分子机制的临床意义 | 第151-154页 |
| (一) 筛选鉴定预示结肠癌转移及其预后的相关分子标志物 | 第151-152页 |
| 1.预示结肠癌分期分级的相关分子 | 第151-152页 |
| 2.预示结肠癌肝转移的相关分子。 | 第152页 |
| (二) 筛选鉴定靶向治疗结肠癌转移的相关分子靶标 | 第152-154页 |
| 1.靶向治疗结肠癌转移有望提高五年生存率。 | 第152-153页 |
| 2.针对结肠癌转移相关分子的靶向治疗药物 | 第153-154页 |
| (1) 贝伐单抗 | 第153页 |
| (2) 西妥昔单抗 | 第153-154页 |
| (3) 塞莱昔布 | 第154页 |
| (4) SU5416 | 第154页 |
| 三.问题与展望 | 第154-156页 |
| 参考文献 | 第156-168页 |
| 致谢 | 第168-169页 |
| 附录 | 第169-171页 |
| 研究生期间发表论文 | 第169-170页 |
| 待发表论文 | 第170页 |
| 参加会议 | 第170页 |
| 主要荣誉 | 第170-171页 |
| 基金资助情况 | 第171-172页 |
