| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| ABBREVIATIONS 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| 1.1 核酸外切体的结构及其功能研究进展 | 第10-21页 |
| 1.1.1 外切体的结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 真核生物中外切体的研究进展 | 第11-21页 |
| 1.2 拟南芥中配子体的发育过程 | 第21-25页 |
| 1.2.1 拟南芥中雌配子体的发育过程 | 第21-24页 |
| 1.2.2 拟南芥中雄配子体的发育过程 | 第24-25页 |
| 1.3 植物细胞壁的形成与组装机制的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.3.1 初生细胞壁的结构与组成成分 | 第26-27页 |
| 1.3.2 细胞壁的延伸与扩展 | 第27-30页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第31-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料及生长条件 | 第31页 |
| 2.1.2 宿主菌 | 第31页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第31页 |
| 2.1.4 各种酶及试剂 | 第31-32页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2.3 常用培养基及试剂的配制 | 第32-34页 |
| 2.3.1 常用培养基的配制 | 第32-33页 |
| 2.3.2 拟南芥原生质体转化试剂的配制 | 第33页 |
| 2.3.3 其它常用试剂及溶液的配制 | 第33-34页 |
| 2.4 实验方法 | 第34-48页 |
| 2.4.1 拟南芥培养 | 第34页 |
| 2.4.2 大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 农杆菌电击感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.4.4 普通PCR扩增 | 第36页 |
| 2.4.5 载体构建的基本方法 | 第36-37页 |
| 2.4.6 植物基因组DNA提取方法 | 第37-38页 |
| 2.4.7 质粒DNA的提取方法 | 第38页 |
| 2.4.8 植物总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.4.9 mRNA的反转录实验 | 第39页 |
| 2.4.10 半定量PCR及实时定量PCR | 第39-40页 |
| 2.4.11 CRISPR/Cas9载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.4.12 amiRNA载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.4.13 转基因植株的筛选及纯合株系的获得 | 第43-44页 |
| 2.4.14 拟南芥原生质体瞬时表达实验 | 第44页 |
| 2.4.15 GUS组织化学染色 | 第44页 |
| 2.4.16 雌雄配子体发育过程及RRP42在雌配子体中表达模式的细胞学观察 | 第44-45页 |
| 2.4.17 叶片结构观察 | 第45-46页 |
| 2.4.18 台盼蓝(Trypan Blue)染色法 | 第46页 |
| 2.4.19 叶绿素含量的测定 | 第46-47页 |
| 2.4.20 虫草素(Cordycepin)处理拟南芥叶片实验 | 第47-48页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第48-79页 |
| 3.1 RRP42 T-DNA插入突变体的获得与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2 通过CRISPR/Cas9技术获得rrp42/RRP42杂合体及其表型观察 | 第49-53页 |
| 3.2.1 rrp42/RRP42杂合体的获得及表型观察 | 第49-51页 |
| 3.2.2 rrp42/RRP42杂合体中配子体发育过程观察 | 第51-53页 |
| 3.2.3 rrp42/RRP42其它杂合体的获得 | 第53页 |
| 3.3 Artificial microRNA技术干扰RRP42的表达 | 第53-64页 |
| 3.3.1 rrp42 knock-down转基因株系的获得 | 第54-56页 |
| 3.3.2 rrp42 knock-down转基因株系的表型分析 | 第56-63页 |
| 3.3.3 RRP42过表达株系的获得及表型分析 | 第63-64页 |
| 3.4 RRP42的组织表达模式及亚细胞定位 | 第64-67页 |
| 3.4.1 RRP42的组织表达模式 | 第64-66页 |
| 3.4.2 RRP42的亚细胞定位 | 第66-67页 |
| 3.5 RRP42参与部分细胞质mRNA降解 | 第67-76页 |
| 3.5.1 rrp42 knock-down突变体中mRNA水平的变化 | 第67-70页 |
| 3.5.2 RRP42参与细胞质中部分mRNA的降解 | 第70-71页 |
| 3.5.3 RRP42与外切体其他亚基功能差异性的初步比较 | 第71-76页 |
| 3.6 外切体其他亚基突变体的制备及其表型观察 | 第76-79页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第79-82页 |
| 4.1 RRP42对拟南芥雌配子体发育和叶形态建成有至关重要的作用 | 第79-80页 |
| 4.2 RRP42作用于细胞质mRNA的降解 | 第80页 |
| 4.3 RRP42与外切体其他亚基功能差异性的比较 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简介 | 第98页 |
