| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-22页 |
| 1.1 国内外研究现状 | 第16-18页 |
| 1.2 研究目的和意义 | 第18页 |
| 1.3 研究内容与技术路线 | 第18-21页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第19-21页 |
| 1.4 研究目标 | 第21-22页 |
| 第二章 与Ubc9相互作用的PRRSV结构蛋白、非结构蛋白的筛选和验证 | 第22-49页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 材料 | 第23-27页 |
| 2.2.2 方法 | 第27-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-47页 |
| 2.3.1 猪源Ubc9基因的扩增及表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.3.2 生物信息学软件预测PRRSV蛋白存在潜在的SUMO化修饰位点 | 第38-39页 |
| 2.3.3 酵母回复杂交筛选与Ubc9互作PRRSV蛋白 | 第39页 |
| 2.3.4 免疫共沉淀验证Ubc9与PRRSV蛋白的相互作用 | 第39-40页 |
| 2.3.5 GST pull-down验证Ubc9与病毒蛋白的相互作用 | 第40-41页 |
| 2.3.6 慢病毒包装验证内源Ubc9与病毒蛋白的相互作用 | 第41-42页 |
| 2.3.7 激光共聚焦验证Ubc9与PRRSV蛋白内、外源共定位 | 第42-45页 |
| 2.3.8 干扰Ubc9对PRRSV增殖的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.9 过表达Ubc9对PRRSV复制的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.10 SUMO化抑制剂银杏酸对PRRSV复制的影响 | 第47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 PRRSV N蛋白SUMO化修饰鉴定及修饰途径的初步探索 | 第49-69页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 材料与方法 | 第50-56页 |
| 3.2.1 材料 | 第50-52页 |
| 3.2.2 方法 | 第52-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-67页 |
| 3.3.1 SUMO1、SUMO2、SUMO3和PIAS1基因的扩增和表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.2 N蛋白赖氨酸突变体的构建 | 第57页 |
| 3.3.3 体外转染验证N蛋白存在SUMO化修饰现象 | 第57-58页 |
| 3.3.4 PRRSV感染验证N蛋白存在SUMO化修饰现象 | 第58页 |
| 3.3.5 质谱鉴定N蛋白存在SUMO化修饰现象 | 第58-59页 |
| 3.3.6 免疫共沉淀鉴定N蛋白突变体SUMO化修饰现象 | 第59-61页 |
| 3.3.7 N蛋白SUMO化修饰途径非SCM介导 | 第61页 |
| 3.3.8 N蛋白SUMO化修饰途径非SIM介导 | 第61-63页 |
| 3.3.9 PIAS1与N蛋白相互作用的验证 | 第63-64页 |
| 3.3.10 PIAS1对N蛋白SUMO化修饰的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.11 干扰PIASl对PRRSV增殖的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.12 过表达PIASl对PRRSV增殖的影响 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-68页 |
| 3.5 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 PRRSV N蛋白赖氨酸突变体病毒拯救及其生物学功能研究 | 第69-90页 |
| 4.1 前言 | 第69-70页 |
| 4.2 材料与方法 | 第70-80页 |
| 4.2.1 材料 | 第70-72页 |
| 4.2.2 方法 | 第72-80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-88页 |
| 4.3.1 N蛋白赖氨酸突变体真核表达载体的构建 | 第80页 |
| 4.3.2 N蛋白赖氨酸突变体中间质粒的构建 | 第80页 |
| 4.3.3 表达N蛋白赖氨酸突变体的JXwn06全长cDNA质粒的构建 | 第80-81页 |
| 4.3.4 PRRSV N蛋白赖氨酸突变体病毒拯救和鉴定 | 第81-82页 |
| 4.3.5 激光共聚焦鉴定N及N蛋白突变体在vero细胞定位 | 第82-83页 |
| 4.3.6 双荧光素检测N蛋白及其突变体对IFN-β和IRFs启动子活性的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.7 激光共聚焦鉴定拯救病毒N蛋白突变体在MARC-145细胞定位 | 第84-85页 |
| 4.3.8 拯救病毒N蛋白突变体SUMO化修饰鉴定 | 第85-86页 |
| 4.3.9 拯救病毒在MARC-145细胞上增殖特性 | 第86页 |
| 4.3.10 拯救病毒在原代PAMs细胞上增殖特性 | 第86-87页 |
| 4.3.11 拯救病毒感染MARC-145细胞IFN-β水平 | 第87页 |
| 4.3.12 拯救病毒感染原代PAMs细胞IFN-β水平 | 第87-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-89页 |
| 4.5 小结 | 第89-90页 |
| 第五章 结论 | 第90-91页 |
| 第六章 创新点 | 第91-92页 |
| 第七章 文献综述 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染与SUMO化修饰 | 第92-104页 |
| 7.1 SUMO化修饰研究进展 | 第94-97页 |
| 7.1.1 SUMO分子发现 | 第94-95页 |
| 7.1.2 SUMO化修饰过程 | 第95-96页 |
| 7.1.3 SUMO化酶 | 第96-97页 |
| 7.1.4 SUMO化修饰底物特点 | 第97页 |
| 7.2 SUMO修饰与病毒复制 | 第97-100页 |
| 7.3 SUMO修饰与免疫反应 | 第100-101页 |
| 7.4 展望 | 第101-104页 |
| 参考文献 | 第104-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 作者简介 | 第116页 |
