| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| ·轮状病毒概述 | 第9-10页 |
| ·轮状病毒疫苗研究进展 | 第10-12页 |
| ·人轮状病毒疫苗研究进展 | 第10-11页 |
| ·牛轮状病毒疫苗研究进展 | 第11-12页 |
| ·粘膜佐剂概述 | 第12-13页 |
| ·粘膜佐剂LT 和LTB 概述 | 第13-17页 |
| ·LT 结构 | 第13-14页 |
| ·LTB 介导的免疫调节机制 | 第14页 |
| ·LT 及LTB 突变体的种类研究 | 第14-15页 |
| ·LTB 免疫原性研究 | 第15页 |
| ·LTB 佐剂作用研究 | 第15-16页 |
| ·LTB 粘膜免疫的方法及其效果 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| ·试验材料 | 第18-25页 |
| ·质粒、菌种和毒株 | 第18页 |
| ·酶和主要分子生物学试剂 | 第18-19页 |
| ·实验器材 | 第19-20页 |
| ·引物合成 | 第20页 |
| ·主要试剂及配制 | 第20-25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·牛轮状病毒总RNA 的提取 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶检测病毒RNA | 第25页 |
| ·轮状病毒反转录 | 第25-26页 |
| ·轮状病毒VP4 全基因的扩增 | 第26页 |
| ·LTB 基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·DNA 片段的纯化回收 | 第27页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制作 | 第27-28页 |
| ·VP4 基因与pEASY-T3 质粒载体的连接与转化 | 第28页 |
| ·LTB 基因与pEASY-T3 质粒载体的连接与转化 | 第28页 |
| ·重组质粒pEASY-T3-VP4 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pEASY-T3-LTB 的鉴定 | 第29页 |
| ·重组原核表达质粒pET32a-VP4 的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组原核表达质粒pET32a-VP4－LTB 的构建及鉴定 | 第30页 |
| ·VP4 基因、VP4-LTB 基因重组原核表达质粒的诱导表达 | 第30页 |
| ·重组蛋白的纯化和回收 | 第30-31页 |
| ·纯化蛋白的含量测定－考马斯亮兰法 | 第31页 |
| ·免疫小鼠 | 第31页 |
| ·免疫小鼠血清牛轮状病毒VP4 IgG 抗体检测（ELISA） | 第31-32页 |
| ·乳鼠攻毒保护试验 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-42页 |
| ·牛轮状病毒总RNA 电泳检测结果 | 第32-33页 |
| ·VP4 基因PCR 扩增结果 | 第33页 |
| ·LTB 基因PCR 扩增结果 | 第33-34页 |
| ·PEASY-T3-VP4 重组质粒的PCR 及酶切鉴定结果 | 第34页 |
| ·VP4 序列测定结果 | 第34-36页 |
| ·PEASY-T3-LTB 重组质粒的PCR 及酶切鉴定结果 | 第36页 |
| ·LTB 测序结果 | 第36-37页 |
| ·重组原核表达质粒PET32A-VP4 的鉴定结果 | 第37页 |
| ·重组原核表达质粒PET32A-VP4-LTB 的鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·VP4 基因、VP4-LTB 基因重组原核表达质粒的诱导表达结果 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白VP4 和VP4-LTB 的纯化和回收结果 | 第39-40页 |
| ·纯化蛋白的含量测定结果 | 第40-41页 |
| ·免疫小鼠血清牛轮状病毒VP4 IGG 抗体检测结果 | 第41页 |
| ·乳鼠攻毒保护试验结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·牛A 组轮状病毒VP4 基因的重要作用 | 第42页 |
| ·VP4 全基因的序列比较与分析 | 第42-43页 |
| ·去掉信号肽的LTB 克隆 | 第43页 |
| ·动物免疫 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
