| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1 细胞自噬的定义 | 第16-18页 |
| ·什么是细胞自噬? | 第16页 |
| ·细胞自噬的发生模型 | 第16-17页 |
| ·细胞自噬的分类 | 第17-18页 |
| 2 细胞自噬的功能 | 第18-21页 |
| ·细胞自噬决定细胞命运 | 第18页 |
| ·细胞自噬与疾病的关系 | 第18-21页 |
| ·细胞自噬与神经退行性疾病 | 第19页 |
| ·细胞自噬与免疫性疾病 | 第19-20页 |
| ·细胞自噬与癌症 | 第20页 |
| ·细胞自噬与衰老 | 第20-21页 |
| 3 细胞自噬的分子机理 | 第21-26页 |
| ·细胞自噬相关基因的发现 | 第21-25页 |
| ·ATG9和它的回收系统 | 第21-22页 |
| ·磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)功能蛋白组 | 第22-23页 |
| ·两个泛素相似的蛋白 | 第23-25页 |
| ·需要解决的问题 | 第25-26页 |
| 第二章 Barkor的发现和功能分析 | 第26-59页 |
| 1 实验材料 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-37页 |
| ·Western Blotting | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE | 第26-27页 |
| ·电泳,转膜和检测 | 第27页 |
| ·细胞表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·细胞培养和继代 | 第29页 |
| ·细胞转染 | 第29页 |
| ·细胞裂解 | 第29-30页 |
| ·GST蛋白的纯化 | 第30页 |
| ·免疫共沉淀 | 第30-31页 |
| ·免疫染色和激光共聚焦显微镜的使用 | 第31-32页 |
| ·可诱导型稳定表达哺乳动物细胞系的建立 | 第32页 |
| ·两步法亲和纯化蛋白(Tandem Affinity Purification) | 第32-34页 |
| ·银染 | 第34页 |
| ·可诱导型shRNA稳定干扰细胞株的建立 | 第34-35页 |
| ·细胞自噬活性的检测 | 第35-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-59页 |
| ·Barkor是Beclin1的一个直接作用蛋白 | 第37-41页 |
| ·Barkor是PI3KC3磷酸激酶活性的一个重要调节因子 | 第41-43页 |
| ·Barkor调节细胞内LC3的脂化和细胞自噬体的形成 | 第43-50页 |
| ·Barkor在细胞自噬介导的细胞抵抗细菌侵染过程中起重要作用 | 第50-51页 |
| ·Barkor通过它的复合螺旋区同Beclin1相互作用 | 第51-52页 |
| ·Barkor和UVRAG相互竞争对Beclin1的作用 | 第52-55页 |
| ·诱导细胞自噬改变Barkor在细胞内的分布 | 第55-57页 |
| ·Barkor是Beclin1转移到细胞自噬体表面过程的必需分子 | 第57-59页 |
| 第三章 Barkor通过BATS结构同细胞自噬体结合 | 第59-76页 |
| 1 实验材料 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-61页 |
| ·体外脂质体(liposome)的制备 | 第59页 |
| ·脂质体-蛋白体外结合实验 | 第59-60页 |
| ·细胞培养,细胞继代,细胞转化,免疫共沉淀和激光共聚焦显微镜 | 第60-61页 |
| 3 实验结果 | 第61-76页 |
| ·Barkor通过其羧基末端的80个氨基酸同细胞自噬体结合 | 第61-66页 |
| ·BATS通过一个两亲性螺旋(amphipathic alpha helix)同细胞自噬体表面膜相互作用 | 第66-71页 |
| ·BATS在体外直接同脂膜相互作用 | 第71-73页 |
| ·BATS决定Barkor在细胞自噬中的作用 | 第73-76页 |
| 第四章 Keap1调节细胞自噬对泛素蛋白的降解 | 第76-94页 |
| 1 实验材料 | 第76-77页 |
| ·细胞株 | 第76页 |
| ·载体 | 第76页 |
| ·抗体 | 第76-77页 |
| 2 实验方法 | 第77-78页 |
| ·细胞培养等 | 第77页 |
| ·三种颜色免疫荧光标记 | 第77-78页 |
| 3 实验结果 | 第78-94页 |
| ·Keap1是LC3和p62蛋白复合体内的一个新蛋白 | 第78-79页 |
| ·氧化胁迫诱导Keap1与p62的相互作用 | 第79-81页 |
| ·Keap1在细胞内同LC3、p62和泛素蛋白聚集体共定位 | 第81-83页 |
| ·Keap1不是细胞自噬的底物 | 第83-85页 |
| ·Keap1调节细胞自噬对泛素化蛋白的降解 | 第85-88页 |
| ·Keap1帮助细胞抵抗泛素化蛋白的毒害作用 | 第88-89页 |
| ·p62调节Keap1在细胞内的定位 | 第89-92页 |
| ·结论 | 第92-94页 |
| 第五章 讨论 | 第94-98页 |
| 参考文献 | 第98-104页 |
| 读博士期间学术成果 | 第104页 |
