| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 研究背景 | 第9-19页 |
| 轮状病毒 | 第9-13页 |
| 1 流行病学 | 第9-10页 |
| 2 轮状病毒检测技术 | 第10-13页 |
| ·病原学检测技术 | 第11页 |
| ·免疫学技术 | 第11页 |
| ·基因检测技术 | 第11-13页 |
| ·RNA基因组电泳 | 第11页 |
| ·分子探针技术 | 第11-12页 |
| ·PCR技术 | 第12页 |
| ·基因芯片技术 | 第12-13页 |
| 实时定量PCR | 第13-19页 |
| 1 实时定量PCR方法的原理 | 第13-14页 |
| 2 定量PCR中的荧光化学 | 第14-17页 |
| ·与DNA结合的荧光染料 | 第14-15页 |
| ·基于荧光标记的引物和探针技术 | 第15-17页 |
| ·TaqMan探针 | 第15-16页 |
| ·分子信标 | 第16页 |
| ·其他化学方法 | 第16-17页 |
| 3 定量PCR的应用 | 第17-19页 |
| 实时定量PCR检测轮状病毒 | 第19-23页 |
| 试验目的 | 第19页 |
| 实验设计 | 第19-23页 |
| 1 引物探针设计及优化 | 第19-20页 |
| 2 标准物 | 第20页 |
| 3 方法 | 第20-21页 |
| 4 试验流程 | 第21-23页 |
| 材料及方法 | 第23-28页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·引物及探针 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要实验设备 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| ·RNA标准品的制备 | 第23-27页 |
| ·引物及探针设计 | 第23-24页 |
| ·总RNA提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-25页 |
| ·PCR产物纯化 | 第25页 |
| ·质粒制备及抽提 | 第25-26页 |
| ·标准RNA制备 | 第26-27页 |
| ·实时定量PCR | 第27-28页 |
| ·引物浓度筛选 | 第27页 |
| ·标准曲线 | 第27页 |
| ·灵敏度及重复性 | 第27-28页 |
| 试验结果 | 第28-35页 |
| 1 VP7全长基因鉴定 | 第28页 |
| 2 质粒及标准RNA | 第28-35页 |
| ·质粒鉴定 | 第28-29页 |
| ·标准RNA鉴定及浓度测定 | 第29-30页 |
| ·实时定量PCR | 第30-35页 |
| ·引物/探针特异性、灵敏度及使用浓度 | 第30-31页 |
| ·标准曲线 | 第31-33页 |
| ·灵敏度 | 第33-34页 |
| ·重复性 | 第34-35页 |
| ·样品测量 | 第35页 |
| 讨论 | 第35-39页 |
| 1 引物探针设计 | 第35-37页 |
| 2 标准品选择和测量 | 第37-38页 |
| 3 方法选择 | 第38-39页 |
| 4 灵敏度与特异性 | 第39页 |
| 5 多重PCR | 第39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 附录 | 第42-47页 |
| 附1 G2、G3及G4型轮状病毒VP7基因序列比对 | 第42-44页 |
| 附2 pGEM-T Easy Vector图谱 | 第44页 |
| 附3 构建入质粒及作为体外转录模板的G4型VP7基因序列 | 第44-45页 |
| 附4 缩略语表 | 第45-46页 |
| 附5 本论文涉及的液体配置 | 第46-47页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |