苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ie定向进化的研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第12-13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第13-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构 | 第13-14页 |
| ·杀虫晶体蛋白作用机理 | 第14页 |
| ·Cry 蛋白的作用模型 | 第14-17页 |
| ·Bt cry1Ie 基因 | 第17-19页 |
| ·蛋白质工程在苏云金芽胞杆菌改良中的应用 | 第19-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白理性设计研究 | 第20-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白非理性设计研究 | 第24-26页 |
| ·本研究的目的意义 | 第26-27页 |
| ·立题依据 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-41页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·培养基与抗生素 | 第28-29页 |
| ·酶与生化试剂 | 第29页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第29-30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·供试昆虫 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·E. coli 质粒 DNA 提取 | 第31页 |
| ·HD73 菌株的大质粒提取 | 第31-32页 |
| ·重叠引物PCR | 第32-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·酶切反应 | 第35页 |
| ·DNA 的回收 | 第35页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌JM109 热激感受态细胞制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌的热激转化 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-38页 |
| ·基因序列的测定及分析 | 第38页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第38页 |
| ·E.coli 表达蛋白的提取 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·蛋白定量 | 第40页 |
| ·杀虫活性测定 | 第40页 |
| ·数据分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-58页 |
| ·Cry1Ie 表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·重叠引物PCR | 第41-42页 |
| ·在E. coli JM109 中的表达 | 第42-43页 |
| ·生物活性测定 | 第43-44页 |
| ·cry1Ie 随机突变文库建立 | 第44-58页 |
| ·突变条件探索 | 第44-45页 |
| ·随机突变文库建立 | 第45-47页 |
| ·随机突变文库序列分析 | 第47-50页 |
| ·随机突变文库蛋白表达 | 第50-52页 |
| ·随机突变文库生物活性测定 | 第52-56页 |
| ·Cry1Ie 三维结构分析 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| ·随机突变文库的构建 | 第58页 |
| ·突变率控制 | 第58-59页 |
| ·突变文库序列分析 | 第59-60页 |
| ·杀虫活性分析 | 第60页 |
| ·下一步工作展望 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
