| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 第一部分 热休克转录因子48 的克隆表达及MAP 激酶P38 对其磷酸化调控 | 第13-35页 |
| ·前言 | 第13-14页 |
| ·材料 | 第14-18页 |
| ·主要试剂 | 第14-17页 |
| ·细胞系及细胞培养的试剂 | 第14-15页 |
| ·质粒提取扩增主要试剂 | 第15-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-23页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·PCR 反应 | 第18-19页 |
| ·回收目的基因片段 | 第19页 |
| ·目的基因片段和载体双酶切 | 第19-20页 |
| ·连接反应 | 第20页 |
| ·转化 | 第20-21页 |
| ·挑取及鉴定克隆 | 第21页 |
| ·pEBG-Hsf4(1-200)和pEBG-Hsf46(196-493)构建 | 第21页 |
| ·细胞培养和基因转染 | 第21-22页 |
| ·免疫印迹和免疫沉淀 | 第22页 |
| ·细胞内GST pull down 实验 | 第22页 |
| ·激酶试验检测P38 对Hsf46 的磷酸化 | 第22-23页 |
| ·结果 | 第23-28页 |
| ·克隆与表达人HSF48 CDNA | 第23-24页 |
| ·HSF48 在HEK 293T 细胞中的表达 | 第24-25页 |
| ·HSF48结合MAP 激酶P38 | 第25-26页 |
| ·细胞内PULL DOWN 试验说明HSF48 结合MAP 激酶P38 | 第26-27页 |
| ·激酶试验检测P38 对HSF48的磷酸化 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-32页 |
| 参考文献 | 第32-35页 |
| 第二部分 HSF48/5299 磷酸化调控HSF48 转录抑制作用 | 第35-70页 |
| ·前言 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第38-43页 |
| ·菌株和表达载体 | 第38页 |
| ·质粒提取扩增主要试剂 | 第38-39页 |
| ·细胞系及细胞培养的试剂 | 第39页 |
| ·转染真核细胞所需试剂 | 第39-40页 |
| ·BCA 蛋白检测试剂盒 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE | 第40-41页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第41-42页 |
| ·定点突变和体外转录翻译试剂盒 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-52页 |
| ·制备DH5A宿主菌感受态细胞 | 第43-44页 |
| ·细胞的转化 | 第44页 |
| ·质粒扩增和提取 | 第44-45页 |
| ·质粒和定点突变 | 第45-46页 |
| ·体外转录和翻译 | 第46页 |
| ·DNA-蛋白沉淀实验 | 第46页 |
| ·DNA-蛋白结合实验 | 第46-47页 |
| ·真核细胞转染 | 第47页 |
| ·免疫印迹 | 第47-50页 |
| ·免疫沉淀 | 第50-51页 |
| ·细胞内GST PULL DOWN实验 | 第51页 |
| ·免疫荧光染色实验 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-63页 |
| ·MLEC/Hsf4-/-细胞系的建立 | 第52-53页 |
| ·Hsf46结合并抑制CMV启动子活性 | 第53-54页 |
| ·体外测定Hsf46 与CMV 启动子的结合 | 第54-57页 |
| ·Hsf46/5299 磷酸化抑制Hsf46 的转录活性 | 第57-58页 |
| ·Hsf4 蛋白结合转录抑制调节因子Daxx | 第58-61页 |
| ·Daxx 抑制Hsf46 介导的Hsp25 表达 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 文献综述 | 第71-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第83-84页 |
