| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 主要符号表 | 第12-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 有机磷水解酶简介 | 第14页 |
| 1.2 有机磷水解酶外源表达宿主概况 | 第14-15页 |
| 1.2.1 大肠埃希氏菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第15页 |
| 1.2.3 酿酒酵母表达系统 | 第15页 |
| 1.3 解脂耶氏酵母表达系统简介 | 第15-16页 |
| 1.3.1 表达菌株 | 第15页 |
| 1.3.2 表达载体 | 第15-16页 |
| 1.4 体外串联多拷贝 | 第16-18页 |
| 1.5 体外串联多拷贝表达策略的意义及局限性 | 第18-19页 |
| 1.6 本文的研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 试剂和酶 | 第21-22页 |
| 2.1.5 仪器和和相关实验设备 | 第22页 |
| 2.1.6 实验常用溶液配方及配制方法 | 第22-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 目的基因的克隆 | 第25-28页 |
| 2.2.2 重组表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.3 目的基因多拷贝表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.4 有机磷水解酶在解脂耶氏酵母中的表达 | 第31-35页 |
| 2.2.5 有机磷水解酶的纯化及酶学性质的研究 | 第35-38页 |
| 第3章 结果与分析 | 第38-50页 |
| 3.1 目的基因的克隆 | 第38-43页 |
| 3.1.1 PCR获得目的基因 | 第38页 |
| 3.1.2 目的基因与载体相连 | 第38-39页 |
| 3.1.3 目的基因二拷贝表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.4 目的基因四拷贝表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.5 菌落PCR初步鉴定基因工程重组酵母菌株 | 第42-43页 |
| 3.2 重组有机磷水解酶的表达 | 第43-45页 |
| 3.2.1 SDS-PAGE分析重组有机磷水解酶MPD的表达情况 | 第43页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE分析重组有机磷水解酶OPH的表达情况 | 第43-44页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE分析重组有机磷水解酶OPHC2的表达量随时间的变化 | 第44页 |
| 3.2.4 酶活测定分析重组有机磷水解酶OPHC2的表达量随时间的变化 | 第44-45页 |
| 3.2.5 Western blot验证重组有机磷水解酶OPHC2 | 第45页 |
| 3.3 重组有机磷水解酶的纯化 | 第45-47页 |
| 3.3.1 镍柱亲和层析纯化重组有机磷水解酶OPHC2 | 第46页 |
| 3.3.2 纯化步骤数据的测定 | 第46-47页 |
| 3.4 纯化重组有机磷水解酶酶学性质的研究 | 第47-50页 |
| 3.4.1 纯化重组有机磷水解酶最适反应温度的测定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 纯化重组有机磷水解酶温度稳定性的测定 | 第48页 |
| 3.4.3 纯化重组有机磷水解酶最适反应pH的测定 | 第48-49页 |
| 3.4.4 纯化重组有机磷水解酶pH稳定性的测定 | 第49-50页 |
| 第4章 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
