中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
缩略语/符号说明 | 第14-16页 |
前言 | 第16-21页 |
研究现状、成果 | 第16-19页 |
研究目的、方法 | 第19-21页 |
1.对象和方法 | 第21-38页 |
1.1 试剂与仪器 | 第21-25页 |
1.1.1 实验细胞和试剂 | 第21-23页 |
1.1.2 实验器材 | 第23页 |
1.1.3 实验试剂配制 | 第23-25页 |
1.2 培养大鼠骨骼肌成肌细胞L6 | 第25-27页 |
1.2.1 L6细胞复苏 | 第25-26页 |
1.2.2 L6细胞培养传代 | 第26页 |
1.2.3 L6细胞冻存 | 第26页 |
1.2.4 L6细胞计数 | 第26-27页 |
1.3 实验分组 | 第27页 |
1.4 细胞葡萄糖摄取检测 | 第27-29页 |
1.4.1 葡萄糖氧化酶法检测原理 | 第27-28页 |
1.4.2 操作步骤 | 第28页 |
1.4.3 细胞葡萄糖摄取计算 | 第28-29页 |
1.5 RT-PCR检测L6细胞各目的因子mRNA表达 | 第29-32页 |
1.5.1 RT-PCR技术实验原理 | 第29页 |
1.5.2 总RNA提取 | 第29-30页 |
1.5.3 细胞RNA逆转录为cDNA | 第30页 |
1.5.4 PCR免疫荧光定量各目的因子引物设计和合成 | 第30-31页 |
1.5.5 荧光定量PCR检测各目的基因mRNA表达水平 | 第31-32页 |
1.6 WesternBlotting方法检测L6细胞各目的因子蛋白表达 | 第32-36页 |
1.6.1 裂解L6细胞,提取总蛋白 | 第32页 |
1.6.2 提取L6细胞膜蛋白 | 第32-33页 |
1.6.3 BCA法检测蛋白浓度 | 第33页 |
1.6.4 配置电泳凝胶 | 第33-34页 |
1.6.5 蛋白上样 | 第34页 |
1.6.6 电泳 | 第34页 |
1.6.7 转膜及封闭 | 第34-35页 |
1.6.8 抗体蛋白免疫反应 | 第35页 |
1.6.9 增强化学发光法显色曝光 | 第35-36页 |
1.7 L6细胞免疫荧光实验 | 第36页 |
1.8 Gln浓度改变对L6细胞影响 | 第36-37页 |
1.9 统计学分析 | 第37-38页 |
2.结果 | 第38-48页 |
2.1 谷氨酰胺增加L6细胞葡萄糖摄取 | 第38页 |
2.2 谷氨酰胺上调PI3K表达 | 第38-39页 |
2.3 谷氨酰胺激活下游因子PDK1 | 第39-40页 |
2.4 AKT磷酸化而激活 | 第40-41页 |
2.5 PKCζ磷酸化而激活 | 第41-42页 |
2.6 上调GLUT4表达并促进GLUT4细胞膜转位 | 第42-43页 |
2.7 免疫荧光显示GLUT4细胞膜转位 | 第43-45页 |
2.8 糖原合成通路中GSK的蛋白表达 | 第45页 |
2.9 不同浓度Gln对L6细胞的影响 | 第45-48页 |
3.讨论 | 第48-51页 |
3.1 谷氨酰胺改善L6细胞葡萄糖摄取 | 第48页 |
3.2 谷氨酰胺增加PI3K/AKT信号通路的表达 | 第48-49页 |
3.3 谷氨酰胺增加PI3K/PDK1/PKCζ信号通路的表达 | 第49页 |
3.4 谷氨酰胺增加GLUT4表达和转位 | 第49-50页 |
3.5 谷氨酰胺增加糖原合成通路GSK磷酸化 | 第50页 |
3.6 不同浓度谷氨酰胺改变L6细胞葡萄糖摄取不同 | 第50-51页 |
结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-59页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第59-60页 |
综述 谷氨酰胺与糖尿病骨骼肌病变关系的研究进展 | 第60-71页 |
参考文献 | 第65-71页 |
致谢 | 第71-73页 |
个人简历 | 第73页 |