| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-23页 |
| 1.1 白念珠菌简介 | 第8-12页 |
| 1.1.1 白念珠菌细胞形态 | 第9页 |
| 1.1.2 白念珠菌菌丝及毒力 | 第9-12页 |
| 1.2 白念珠菌细胞内钙离子平衡及钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径 | 第12-22页 |
| 1.2.1 白念珠菌钙离子平衡与其毒力的关系 | 第12-13页 |
| 1.2.2 白念珠菌钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径 | 第13-14页 |
| 1.2.3 钙调蛋白 | 第14页 |
| 1.2.4 钙调磷酸酯酶及其调控 | 第14-17页 |
| 1.2.5 转录因子Crz1 | 第17-20页 |
| 1.2.6 白念珠菌钙离子运输系统 | 第20-22页 |
| 1.3 白念珠菌GRACE文库 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验所用仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 实验所用主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 实验所用其它试剂及试剂盒 | 第23-25页 |
| 2.2 实验所用溶液及配制方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 白念珠菌基因组提取相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第26页 |
| 2.2.3 白念珠菌转化相关溶液 | 第26页 |
| 2.2.4 蛋白质提取缓冲液 | 第26页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE相关缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.2.6 蛋白质转印及封闭缓冲液 | 第27页 |
| 2.2.7 实验所用培养基及配制方法 | 第27-28页 |
| 2.3 通用实验方法 | 第28-39页 |
| 2.3.1 菌株保存 | 第28页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第28页 |
| 2.3.3 PCR反应体系和产物纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 酶切反应体系 | 第29页 |
| 2.3.5 克隆反应体系 | 第29-30页 |
| 2.3.6 质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| 2.3.7 DNA片段转化白念珠菌细胞 | 第30页 |
| 2.3.8 白念珠菌细胞基因组提取方法 | 第30-31页 |
| 2.3.9 倍比稀释法进行表型分析实验 | 第31-32页 |
| 2.3.10 白念珠菌细胞总蛋白提取 | 第32页 |
| 2.3.11 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.12 Westernblot方法检测蛋白 | 第32-33页 |
| 2.3.13 转录组测序 | 第33-34页 |
| 2.3.14 诱导His6标签蛋白在大肠杆菌细胞中的表达 | 第34页 |
| 2.3.15 His6标签蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.16 凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)实验原理及步骤流程 | 第35-36页 |
| 2.3.17 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验原理及流程 | 第36-38页 |
| 2.3.18 生物信息学方法 | 第38-39页 |
| 第三章 白念珠菌基因组中与钙离子敏感性相关基因的文库筛选 | 第39-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-42页 |
| 3.1.1 实验菌株-白念珠菌GRACE基因突变菌株文库 | 第39-40页 |
| 3.1.2 实验中用到的引物 | 第40-42页 |
| 3.2 本章实验方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 本章实验所用到的通用实验方法 | 第42页 |
| 3.2.2 白念珠菌钙离子敏感菌株的筛选 | 第42-43页 |
| 3.2.3 钙离子敏感菌株表型抑制实验 | 第43页 |
| 3.2.4 GRACE1.0文库菌株构建 | 第43-44页 |
| 3.3 本章实验结果 | 第44-52页 |
| 3.3.1 白念珠菌钙离子敏感菌株GRACE文库筛选结果 | 第44-47页 |
| 3.3.2 CsA对钙离子敏感菌株敏感性的抑制作用 | 第47页 |
| 3.3.3 GRACE1.0菌株对钙离子表型 | 第47-48页 |
| 3.3.4 钙离子耐受所需基因的功能及其编码蛋白的亚细胞定位分析 | 第48-50页 |
| 3.3.5 白念珠菌21个GRACE菌株钙离子敏感表型的专一性 | 第50-51页 |
| 3.3.6 MgCl2对21个GRACE菌株钙离子敏感表型的抑制作用 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-55页 |
| 第四章 全基因组RNA测序鉴定钙离子激活且依赖Crz1的目标基因 | 第55-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 实验所用菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.1.2 实验所用引物 | 第55页 |
| 4.2 本章实验方法 | 第55-63页 |
| 4.2.1 本章实验所用到的通用实验方法 | 第55页 |
| 4.2.2 CRISPR/Cas9方法构建crz1/crz1失活突变株 | 第55-59页 |
| 4.2.3 crz1/crz1回复突变株构建 | 第59-60页 |
| 4.2.4 Crz1-HA融合蛋白构建策略 | 第60-61页 |
| 4.2.5 His6-Crz1诱导表达菌株的构建 | 第61-63页 |
| 4.3 实验结果 | 第63-78页 |
| 4.3.1 CRISPR/Cas9基因编辑手段构建白念珠菌CRZ1基因的失活突变体及表型验证 | 第63-67页 |
| 4.3.2 全基因组分析钙离子存在下受Crz1正调控的基因 | 第67-75页 |
| 4.3.3 钙离子激活和受Crz1正调控的基因的启动子上Crz1结合位点的分析 | 第75-78页 |
| 4.4 本章小结 | 第78-80页 |
| 第五章 HSL1基因的失活突变菌株构建及其表型分析 | 第80-85页 |
| 5.1 实验材料 | 第80-81页 |
| 5.1.1 实验所用菌株和质粒 | 第80页 |
| 5.1.2 实验所用引物 | 第80页 |
| 5.1.3 实验所用试剂 | 第80-81页 |
| 5.2 本章实验方法 | 第81页 |
| 5.2.1 本章实验所用到的通用实验方法 | 第81页 |
| 5.2.2 CRISPR/Cas9方法构建失活突变株 | 第81页 |
| 5.2.3 pCR4-HSL1回复质粒构建实验 | 第81页 |
| 5.3 本章实验结果 | 第81-85页 |
| 5.3.1 抑制CaHSL1基因的表达导致白念珠菌细胞对钙离子敏感 | 第81-82页 |
| 5.3.2 CRISPR方法获得的HSL1基因失活突变株的表型分析 | 第82-85页 |
| 主要结论与展望 | 第85-87页 |
| 主要结论 | 第85-86页 |
| 展望 | 第86-87页 |
| 论文创新点 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 附录 ：作者在攻读博士期间发表的论文 | 第98-99页 |
| 与课题相关论文 | 第98页 |
| 其他论文 | 第98-99页 |
