| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| abstract | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第20-27页 |
| 1.1 蜜蜂概述 | 第20-21页 |
| 1.1.1 蜜蜂生物学特性 | 第20-21页 |
| 1.1.2 蜜蜂间的通讯 | 第21页 |
| 1.2 昆虫间嗅觉识别及相关蛋白概述 | 第21-24页 |
| 1.2.1 气味结合蛋白与化学感受蛋白简介 | 第22页 |
| 1.2.2 气味结合蛋白与化学感受蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3 生化结合及定点突变研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3.1 生化结合、分子互作研究进展 | 第24页 |
| 1.3.2 定点突变研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4 研究背景、内容和意义 | 第25-27页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第25-26页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第26页 |
| 1.4.3 研究意义 | 第26-27页 |
| 2 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4的原核表达、蛋白纯化及配基结合机理研究 | 第27-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1.1 主要实验材料、试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.1.3 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4重组蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.1.4 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4重组蛋白的分离纯化与复性 | 第30-31页 |
| 2.1.5 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4重组蛋白的结合机理分析 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-44页 |
| 2.2.1 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4蛋白诱导、纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.2 荧光猝灭光谱分析 | 第33页 |
| 2.2.3 猝灭机理及结合常数分析 | 第33-36页 |
| 2.2.4 热力学分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5 CSP1的紫外吸收光谱测定 | 第37-38页 |
| 2.2.6 CSP1的同步荧光分析 | 第38-40页 |
| 2.2.7 CSP1的圆二色 (CD)光谱分析 | 第40页 |
| 2.2.8 分子对接 | 第40-42页 |
| 2.2.9 吡虫啉影响CSP1的功能分析 | 第42-44页 |
| 2.3 讨论 | 第44-46页 |
| 3 中蜂CSP1与β-紫罗兰酮、吡虫啉作用中关键氨基酸位点鉴定 | 第46-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 3.1.1 主要实验材料、试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.2 分子对接 | 第47页 |
| 3.1.3 设计突变引物和定点突变 | 第47-48页 |
| 3.1.4 突变蛋白诱导及荧光结合实验 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-56页 |
| 3.2.1 分子对接 | 第48-49页 |
| 3.2.2 引物设计及突变结果 | 第49-50页 |
| 3.2.3 突变蛋白诱导及荧光猝灭实验 | 第50-52页 |
| 3.2.4 CSP1突变蛋白与β-紫罗兰酮的热力学分析及分子对接 | 第52-54页 |
| 3.2.5 CSP1突变蛋白与吡虫啉的荧光猝灭实验及热力学分析 | 第54-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-58页 |
| 4 中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的基因克隆及基因可变性分析 | 第58-67页 |
| 4.1 材料与方法 | 第58-61页 |
| 4.1.1 主要实验材料、试剂与仪器 | 第58页 |
| 4.1.2 中华蜜蜂触角总RNA提取和反转录 | 第58-59页 |
| 4.1.3 中蜂ASP2的基因扩增、克隆及测序 | 第59-61页 |
| 4.1.4 中蜂ASP2的基因序列及蛋白结构分析 | 第61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-66页 |
| 4.2.1 中华蜜蜂触角总RNA提取、反转录及基因扩增克隆 | 第61-62页 |
| 4.2.2 中华蜜蜂ASP2基因序列分析 | 第62-64页 |
| 4.2.3 中蜂ASP2与意蜂ASP2比对及基因剪切情况 | 第64-65页 |
| 4.2.4 中意蜂ASP2的分子对接 | 第65-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-67页 |
| 5 中蜂ASP2与β-紫罗兰酮、吡虫啉作用中关键氨基酸位点鉴定 | 第67-74页 |
| 5.1 材料与方法 | 第67-68页 |
| 5.1.1 主要实验材料、试剂与仪器 | 第67页 |
| 5.1.2 定点突变 | 第67-68页 |
| 5.1.3 突变蛋白诱导及荧光结合实验 | 第68页 |
| 5.2 结果与分析 | 第68-72页 |
| 5.2.1 定点突变及突变蛋白诱导 | 第68-69页 |
| 5.2.2 野生型ASP2蛋白及突变型ASP2蛋白与β-紫罗兰酮的荧光结合实验及热力学分析 | 第69-71页 |
| 5.2.3 野生型ASP2蛋白及突变型ASP2蛋白与吡虫啉的荧光结合实验及热力学分析 | 第71-72页 |
| 5.3 讨论 | 第72-74页 |
| 6 中华蜜蜂触角的扫描电镜与化学感受蛋白CSP1的亚细胞定位 | 第74-81页 |
| 6.1 材料与方法 | 第74-77页 |
| 6.1.1 主要实验材料、试剂与仪器 | 第74-75页 |
| 6.1.2 中华蜜蜂触角的扫描电镜 | 第75页 |
| 6.1.3 中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1抗体的制备及效价测定 | 第75-76页 |
| 6.1.4 中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1的亚细胞定位 | 第76-77页 |
| 6.2 结果与分析 | 第77-80页 |
| 6.2.1 中华蜜蜂触角的扫描电镜 | 第77-79页 |
| 6.2.2 中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1抗体的制备及效价测定 | 第79页 |
| 6.2.3 中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1的亚细胞定位 | 第79-80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-81页 |
| 7 总结与展望 | 第81-86页 |
| 7.1 研究总结 | 第81-85页 |
| 7.1.1 中华蜜蜂CSP1、CSP2、CSP4的原核表达、蛋白纯化及配基结合机理研究 | 第81-83页 |
| 7.1.2 定点突变确定中蜂CSP1与β-紫罗兰酮、吡虫啉作用中关键氨基酸位点 | 第83页 |
| 7.1.3 中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的基因克隆及基因编辑分析 | 第83-84页 |
| 7.1.4 定点突变确定中蜂ASP2与β-紫罗兰酮、吡虫啉作用中关键氨基酸位点 | 第84页 |
| 7.1.5 中华蜜蜂触角的扫描电镜与化学感受蛋白CSP1的亚细胞定位 | 第84-85页 |
| 7.2 课题展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 作者简介 | 第94-95页 |
