| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 1 研究背景 | 第10-11页 |
| 2 本论文工作开展的整体思路 | 第11-13页 |
| 2.1 研究依据 | 第11页 |
| 2.2 研究目的及意义 | 第11页 |
| 2.3 研究内容与方法 | 第11-12页 |
| 2.4 技术路线 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 青天葵研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1 栽培和组织培养研究 | 第13-14页 |
| 1.2 化学成分研究 | 第14页 |
| 1.3 药理作用研究 | 第14-15页 |
| 1.4 分子生物学研究 | 第15页 |
| 2 独脚金内酯研究进展 | 第15-20页 |
| 2.1 独脚金内酯的发现 | 第16-17页 |
| 2.2 独脚金内酯的生物合成 | 第17-18页 |
| 2.3 独脚金内酯的信号转导 | 第18-19页 |
| 2.4 独脚金内酯的生物学作用 | 第19-20页 |
| 3 展望 | 第20-21页 |
| 第二章 青天葵独脚金内酯合成相关基因NfCCD7的克隆 | 第21-38页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 1.1 植物材料 | 第21页 |
| 1.2 试剂 | 第21页 |
| 1.3 菌种及载体 | 第21页 |
| 1.4 培养基与抗生素 | 第21页 |
| 1.5 仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.6 引物与测序 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.1 青天葵转录组Unigenes的筛选 | 第22-23页 |
| 2.2 青天葵叶片总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.3 总RNA的质量检测 | 第23页 |
| 2.4 总RNA第一链cDNA的合成 | 第23-24页 |
| 2.5 青天葵NfCCD7的扩增 | 第24-29页 |
| 2.6 青天葵NfCCD7cDNA全长的拼接 | 第29页 |
| 2.7 青天葵NfCCD7编码区的扩增 | 第29-30页 |
| 2.8 基因编码蛋白的分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 3.1 青天葵转录组Unigenes的筛选 | 第30-31页 |
| 3.2 青天葵叶片总RNA提取 | 第31页 |
| 3.3 青天葵NfCCD7cDNA全长序列的获得 | 第31-32页 |
| 3.4 NfCCD7编码区扩增 | 第32-33页 |
| 3.5 青天葵NfCCD7基因编码蛋白的分析 | 第33-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 NfCCD7/EGFP融合基因在烟草原生质体中的瞬时表达 | 第38-45页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第38-39页 |
| 1.1 植物材料 | 第38页 |
| 1.2 试剂 | 第38页 |
| 1.3 菌种及载体 | 第38页 |
| 1.4 培养基与抗生素 | 第38页 |
| 1.5 溶液配制 | 第38-39页 |
| 1.6 仪器设备 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 融合基因表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.2 烟草原生质体的提取 | 第41页 |
| 2.3 PEG介导融合基因瞬时表达 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.1 融合基因表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 融合基因的瞬时表达 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 农杆菌介导NfCCD7转化拟南芥的初步探索 | 第45-52页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第45-46页 |
| 1.1 植物材料 | 第45页 |
| 1.2 试剂 | 第45页 |
| 1.3 菌种及载体 | 第45页 |
| 1.4 培养基与抗生素 | 第45-46页 |
| 1.5 溶液配制 | 第46页 |
| 1.6 仪器设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| 2.1 表达载体pRI101AN-NfCCD7的构建 | 第46-47页 |
| 2.2 冻融法转化农杆菌 | 第47-48页 |
| 2.3 农杆菌浸染拟南芥 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.1 NfCCD7目的片段的扩增 | 第49页 |
| 3.2 载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3 拟南芥转基因植株的筛选 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 结语 | 第52-54页 |
| 1 结论 | 第52-53页 |
| 1.1 从转录组数据库中筛选获得了目的Unigenes片段 | 第52页 |
| 1.2 克隆得到了NfCCD7cDNA全长序列 | 第52页 |
| 1.3 克隆所得基因编码的NfCCD7蛋白定位于细胞的叶绿体中 | 第52页 |
| 1.4 获得了T_1代转基因拟南芥苗和种子 | 第52-53页 |
| 2 展望 | 第53-54页 |
| 2.1 遗传转化研究 | 第53页 |
| 2.2 NfCCD7的时空表达 | 第53页 |
| 2.3 NfCCD7的蛋白功能研究 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-79页 |
| 附录1：Prime Script~(TM)Ⅱ1~(st) Stand cDNA Synthesis Kit说明书 | 第61-62页 |
| 附录2：DNA纯化回收试剂盒说明书 | 第62-63页 |
| 附录3：pLB零背景快速克隆试剂盒说明书 | 第63-66页 |
| 附录4：SMARTer?RACE5’/3’Kit说明书 | 第66-68页 |
| 附录5：ClonExpress?MultiS One Step Cloning Kit说明书 | 第68-72页 |
| 附录6：StarPure柱式超纯质粒大提试剂盒说明书 | 第72-73页 |
| 附录7：植物表达载体pRI101AN-DNA图谱信息 | 第73-74页 |
| 附录8：Phire Plant Direct PCR Master Mix试剂盒说明书 | 第74-78页 |
| 附录9：英文缩略语 | 第78-79页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 统计学审核证明 | 第81页 |
