摘要 | 第4-7页 |
abstract | 第7-9页 |
第一章 序言 | 第14-19页 |
1.1 糖尿病 | 第14-15页 |
1.2 糖尿病肾病 | 第15-16页 |
1.3 SphK-S1P信号通路 | 第16页 |
1.4 SphK-S1P信号通路与糖尿病、肾病研究报道 | 第16-18页 |
1.5 本研究目的 | 第18-19页 |
第二章 SphK2基因敲除小鼠繁殖与鉴定 | 第19-28页 |
2.1 前言 | 第19页 |
2.2 实验材料 | 第19-21页 |
2.2.1 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
2.2.2 实验动物 | 第20页 |
2.2.3 主要试剂 | 第20-21页 |
2.3 实验方法 | 第21-24页 |
2.3.1 SphK2基因敲除小鼠的繁殖 | 第21页 |
2.3.2 配对情况 | 第21页 |
2.3.3 饲养环境 | 第21页 |
2.3.4 小鼠的基因型鉴定 | 第21-22页 |
2.3.5 SphK2蛋白检测 | 第22-24页 |
2.4 实验结果 | 第24-26页 |
2.4.1 小鼠的生长情况及基因型鉴定 | 第24-25页 |
2.4.2 小鼠基因型鉴定结果 | 第25-26页 |
2.4.3 SphK2敲除小鼠的繁育情况 | 第26页 |
2.4.4 基因敲除小鼠SphK2蛋白质表达 | 第26页 |
2.5 小结与讨论 | 第26-28页 |
第三章 SphK2基因敲除对STZ诱导糖尿病小鼠降糖作用的研究 | 第28-42页 |
3.1 前言 | 第28页 |
3.2 实验材料 | 第28-31页 |
3.2.1 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
3.2.2 实验动物 | 第29页 |
3.2.3 主要试剂 | 第29-30页 |
3.2.4 主要溶液的配置 | 第30-31页 |
3.3 实验方法 | 第31-36页 |
3.3.1 糖尿病小鼠模型的建立 | 第31-32页 |
3.3.2 小鼠血糖检测 | 第32页 |
3.3.3 小鼠眼眶取血 | 第32页 |
3.3.4 小鼠血浆胰岛素的检测 | 第32-33页 |
3.3.5 小鼠胰腺组织的固定、包埋和石蜡切片 | 第33-34页 |
3.3.6 H&E染色观察胰腺病理形态 | 第34页 |
3.3.7 免疫组织化学染色检测胰岛素和胰高血糖素表达 | 第34-35页 |
3.3.8 Tunel染色检测胰岛凋亡 | 第35-36页 |
3.4 实验结果 | 第36-41页 |
3.4.1 SphK2基因敲除抵抗STZ诱导的糖尿病小鼠 | 第36-37页 |
3.4.2 SphK2基因敲除对糖尿病小鼠血浆胰岛素的影响 | 第37-38页 |
3.4.3 SphK2基因敲除对糖尿病小鼠胰腺影响 | 第38-39页 |
3.4.4 SphK2基因敲除对胰腺组织胰岛素的影响 | 第39页 |
3.4.5 SphK2基因敲除对胰腺组织胰高血糖素的影响 | 第39-40页 |
3.4.6 SphK2基因敲除抑制胰腺细胞凋亡 | 第40-41页 |
3.5 小结与讨论 | 第41-42页 |
第四章 SphK2敲除对STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏保护作用的研究 | 第42-57页 |
4.1 前言 | 第42页 |
4.2 实验材料 | 第42-45页 |
4.2.1 主要仪器与设备 | 第42-44页 |
4.2.2 实验动物 | 第44页 |
4.2.3 主要试剂 | 第44-45页 |
4.2.4 主要试剂配制 | 第45页 |
4.3 实验方法 | 第45-49页 |
4.3.1 糖尿病小鼠模型的建立 | 第45-46页 |
4.3.2 收集小鼠 24 小时尿样,检测 24 小时尿蛋白含量 | 第46页 |
4.3.3 小鼠眼眶取血 | 第46页 |
4.3.4 小鼠血尿素氮、血肌酐的测定 | 第46页 |
4.3.5 小鼠血尿素氮、血肌酐的测定 | 第46-47页 |
4.3.6 制作APES玻片 | 第47页 |
4.3.7 小鼠肾脏组织的固定、包埋和石蜡切片 | 第47页 |
4.3.8 肾脏PAS染色 | 第47-48页 |
4.3.9 肾脏 PAS 染色 | 第48页 |
4.3.10 肾脏天狼猩红染色 | 第48页 |
4.3.11 免疫组织化学(IHC)染色检测SphK2、FN蛋白 | 第48页 |
4.3.12 Westernblot检测肾脏SphK2、FN蛋白的表达 | 第48页 |
4.3.13 RT-PCR检测肾脏FNmRNA表达 | 第48-49页 |
4.3.14 数据处理 | 第49页 |
4.4 实验结果 | 第49-55页 |
4.4.1 SphK2在糖尿病肾病肾脏组织中高表达 | 第49-50页 |
4.4.2 SphK2基因敲除对STZ诱导糖尿病小鼠代谢参数的影响 | 第50-51页 |
4.4.3 SphK2基因敲除对STZ诱导糖尿病小鼠肾脏整体形态的影响 | 第51-52页 |
4.4.4 SphK2基因敲除对肾脏细胞外基质影响 | 第52页 |
4.4.5 SphK2基因敲除对肾脏纤维化影响 | 第52-53页 |
4.4.6 SphK2基因敲除抑制肾脏FN表达 | 第53-54页 |
4.4.7 SphK2抑制剂对糖尿病肾病的治疗作用 | 第54-55页 |
4.5 小结与讨论 | 第55-57页 |
第五章 全文结论与展望 | 第57-59页 |
5.1 结论与创新之处: | 第57页 |
5.2 本实验展望与不足之处: | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-64页 |
附录一 | 第64-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
攻读研究生硕士学位期间发表论文 | 第67页 |